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關鍵詞：綿羊肺炎支原體 原核表達 western blot 間接elisa 

摘要：為解決綿羊肺炎支原體感染的預防問題,建立一種簡單、快速、成本低的診斷方法,構建綿羊肺炎支原體EF-Tu基因原核表達載體,誘導純化重組蛋白并用Western blot分析其反應原性,以重組蛋白為診斷抗原,建立綿羊肺炎支原體間接ELISA檢測方法,評估其特異性和靈敏性。結果表明,構建的重組蛋白純化后,經Western blot證實具有良好的反應原性;間接ELISA反應條件優(yōu)化顯示,抗原稀釋度為0.25μg/mL,一抗最佳稀釋濃度為1∶50,最佳孵育時間為90 min,封閉液為50 g/L脫脂奶粉,二抗最佳稀釋倍數(shù)為1∶8 000,最佳孵育時間為60 min,特異性與靈敏性良好;該方法與間接血凝法對100份血清進行檢測,兩者符合率為88.7%。說明試驗建立的綿羊肺炎支原體間接ELISA檢測方法可以推廣使用。

動物醫(yī)學進展雜志要求:

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