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三角帆蚌dPGAM基因的克隆與表達(dá)分析
關(guān)鍵詞：三角帆蚌 磷酸甘油酸變位酶 克隆 表達(dá)
摘要：為探究貝類磷酸甘油酸變位酶(PGAM)基因的功能,以紫色和黃色家系三角帆蚌為試驗(yàn)材料,采用RACE-PCR法克隆得到三角帆蚌1個(gè)輔因子依賴型磷酸甘油酸變位酶基因(dPGAM)的cDNA序列,命名為HcdPGAM,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)和表達(dá)特性分析。結(jié)果表明,HcdPGAM基因包含1個(gè)750 bp的開放閱讀框,編碼1個(gè)含250個(gè)氨基酸的假定蛋白,并含有1個(gè)保守的組氨酸磷酸酶結(jié)構(gòu)域;HcdPGAM與其他動(dòng)物PGAM的氨基酸序列均具有較高的相似性(58.8%~82.0%)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析顯示,HcdPGAM在所檢測(cè)的紫色蚌和黃色蚌的鰓、外套膜、閉殼肌、消化腺、性腺組織和血淋巴細(xì)胞6種組織中均有表達(dá),其中在閉殼肌中的表達(dá)量相對(duì)較高,且紫色系蚌閉殼肌中的表達(dá)水平顯著高于黃色系,表明該基因與三角帆蚌的能量代謝與生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān),是貝類分子輔助育種的一種潛在的標(biāo)記;嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)可極顯著上調(diào)HcdPGAM基因的表達(dá)水平(24 h和48 h),表明HcdPGAM基因在貝類抗細(xì)菌感染的免疫反應(yīng)相關(guān)能量代謝過(guò)程中也發(fā)揮著重要作用。本研究結(jié)果為明確貝類PGAM的功能和篩選三角帆蚌不同顏色家系間的特異性分子標(biāo)記提供了一定的理論依據(jù)。
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