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敲低高遷移率族蛋白B1(HMGB1)抑制高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡
關(guān)鍵詞：高糖 腎小球系膜細(xì)胞 炎癥反應(yīng)
摘要：目的探討敲低高遷移率族蛋白B1(HMGB1)水平對(duì)高糖培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞(GMC)增殖的影響及機(jī)制。方法培養(yǎng)大鼠GMC,分為正常組、高糖處理組、陰性對(duì)照小干擾RNA聯(lián)合高糖處理組(siRNA-NC-高糖組)、HMGB1小干涉RNA聯(lián)合高糖處理組(siRNA-HMGB1-高糖組)。正常組GMC用正常DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng);高糖處理組GMC換用高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng);siRNA-HMGB1-高糖組GMC轉(zhuǎn)染siRNA-HMGB1序列6 h后,用高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h;siRNA-NC-高糖組GMC轉(zhuǎn)染siRNA-NC序列6 h后,用高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)GMC中HMGB1 mRNA水平,MTT法檢測(cè)GMC增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GMC凋亡情況,Western blot法檢測(cè)GMC中HMGB1、核因子κBp65(NF-κBp65)和核因子κB抑制物α(IκBα)蛋白水平,ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、IL-6和腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。結(jié)果與siRNA-NC-高糖組或單純高糖組相比,siRNA-HMGB1-高糖組GMC中HMGB1 mRNA水平降低,在處理24、48、72、96 h,GMC增殖活性和細(xì)胞凋亡率降低;敲低GMC的HMGB1水平后,細(xì)胞NF-κBp65蛋白水平降低、IκBα蛋白水平增加,且上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低。結(jié)論敲低GMC的HMGB1水平抑制高糖誘導(dǎo)的GMC增殖,并促進(jìn)其凋亡,可能與抑制NF-κB/IκBα通路有關(guān)。
細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志要求:
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