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miR-383通過下調(diào)細胞周期相關(guān)蛋白的表達抑制小鼠卵泡顆粒細胞的增殖
關(guān)鍵詞：卵泡 顆粒細胞 增殖 細胞周期
摘要：目的探討微小RNA-383(miR-383)在小鼠卵泡不同發(fā)育階段的表達規(guī)律以及對顆粒細胞增殖的影響。方法取健康雌性受孕昆明小鼠不同小鼠出生后12、21、21 d[腹腔注射10 IU孕馬血清促性腺激素(PMSG)48 h后]和21 d[腹腔注射10 IU PMSG 48 h和10 IU人絨毛膜促性腺激素(hCG)6 h后]的卵巢組織、卵泡和顆粒細胞,通過實時定量PCR法檢測miR-383的表達情況。取小鼠出生21 d的顆粒細胞,分別轉(zhuǎn)染miR-383模擬物(miR-383 mimics)或miR-383抑制物(miR-383 inhibitor),另外設(shè)置陰性對照組。通過噻唑藍(MTT)法檢測顆粒細胞增殖情況,流式細胞術(shù)檢測顆粒細胞的細胞周期變化。采用Western blot法檢測細胞周期相關(guān)蛋白細胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin B、細胞周期蛋白依賴激酶1(CDK1)、CDK2、CDK4的蛋白水平。結(jié)果與小腔前卵泡相比,大腔前卵泡中miR-383的含量降低,但是在腔較小的有腔卵泡中含量升高,成熟卵泡中的含量又進一步降低。與小腔前卵泡顆粒細胞相比,大腔前卵泡和腔較小的有腔卵泡顆粒細胞中miR-383的含量降低,但是在成熟卵泡顆粒細胞中的含量卻有所上調(diào)。與空白組相比,miR-383 mimics組顆粒細胞的增殖速度減慢,且G0/G1期比例升高,G2/M期比例降低,cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平降低;而miR-383 inhibitor組顆粒細胞的增殖速度加快,G0/G1期比例降低,G2/M期比例升高,且cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平增加。結(jié)論miR-383可通過抑制細胞周期相關(guān)蛋白的表達,將顆粒細胞周期阻滯在G0/G1期,進而抑制卵泡顆粒細胞的增殖。
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