購物車(0)
銅綠假單胞菌溶血素共調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)純化及抗血清的制備
關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌 溶血素共調(diào)節(jié)蛋白 蛋白純化 抗血清
摘要：目的純化銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)溶血素共調(diào)節(jié)蛋白(Hemolysin co-regulated protein,Hcp)并制備抗血清。方法從NCBI網(wǎng)站查到銅綠假單胞菌Hcp蛋白序列,采用Signal IP 4.1預(yù)測定位及信號肽情況;登錄Swiss model網(wǎng)站預(yù)測三級結(jié)構(gòu)情況;登錄www.iedb.org網(wǎng)站預(yù)測其B細(xì)胞表位。根據(jù)Hcp基因序列設(shè)計特異性引物,以銅綠假單胞菌基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增Hcp基因,經(jīng)雙酶切后連到pET28a。將重組質(zhì)粒pET28a-Hcp轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),然后用IPTG誘導(dǎo)重組Hcp蛋白表達(dá)。使用鎳柱親和層析法純化目的蛋白。用Hcp蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法檢測抗血清效價。結(jié)果 Hcp定位在細(xì)菌細(xì)胞漿,無信號肽,6個單體蛋白組成一個環(huán)狀的中空結(jié)構(gòu),含有多個B細(xì)胞表位。構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒pET28a-Hcp能表達(dá)23.9×10~3大小的Hcp蛋白,鎳柱層析后得到高純度的Hcp蛋白,重組Hcp蛋白誘導(dǎo)的抗體效價大于1∶10 240。結(jié)論成功重組表達(dá)銅綠假單胞菌Hcp蛋白及高滴度的抗血清,為研究Hcp的功能奠定了實驗基礎(chǔ)。
中國病原生物學(xué)雜志要求:
{1}作者的真實姓名、工作地址、學(xué)術(shù)簡歷和聯(lián)系方式。
{2}文章請勿一稿多投，審稿周期為一個月，自收到來稿一個月內(nèi)郵件回復(fù)作者，如果一個月內(nèi)未收到郵件回復(fù)，作者可自行處理稿件。
{3}圖、表和公式應(yīng)通篇順序編號，圖題、表題應(yīng)有中英文對照。表格應(yīng)采用三線表形式，內(nèi)容以中文表述。具體要求請在本刊網(wǎng)站下載《撰文書寫要求》。
{4}稿件注釋一律采用 “腳注”。注釋規(guī)則請參下附《注釋規(guī)范》，請投稿者嚴(yán)格遵循。
{5}前言：主要概述本文的立題依據(jù)、研究思路、實驗基礎(chǔ)及國內(nèi)外現(xiàn)狀，并應(yīng)明確說明本文研究目的、創(chuàng)新性或特點等。
注：因版權(quán)方要求，不能公開全文，如需全文，請咨詢雜志社
