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黃熱病毒可視化RT-LAMP檢測方法的建立

鄭夔; 戴俊; 劉麗娟; 袁帥; 孫芳芳; 黃吉城 廣東檢驗檢疫技術(shù)中心; 廣東廣州510700; 中國檢驗檢疫科學研究院

關(guān)鍵詞:黃熱病毒 環(huán)介導等溫擴增 等溫擴增 

摘要:目的建立一種根據(jù)顏色變化判斷結(jié)果的黃熱病毒可視化RT-LAMP快速核酸檢測方法。方法針對112株目前GeneBank上所有基因亞型黃熱病毒株的5’端非編碼區(qū)保守性核苷酸序列,設(shè)計黃熱病毒特異性LAMP引物,建立黃熱病毒可視化RT-LAMP檢測方法。評價該方法的特異性、靈敏性,并用臨床樣本和模擬樣本進行應(yīng)用性驗證。結(jié)果建立的RT-LAMP方法有較高的特異性,與登革病毒、裂谷熱病毒、西尼羅病毒、乙腦病毒及基孔肯雅病毒無交叉反應(yīng);用體外轉(zhuǎn)錄的RNA模板評估,其靈敏性可達102拷貝/μl;用口岸發(fā)熱病例血清樣本驗證,該方法可檢出血清中的黃熱病毒。結(jié)論建立的黃熱病毒可視化RT-LAMP檢測方法操作簡便、快速、特異性好,可應(yīng)用于黃熱病毒的現(xiàn)場檢測。

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