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雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白與幽門(mén)螺桿菌鐵蛋白基因融合PCR擴(kuò)增及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建
關(guān)鍵詞：vp 2基因 幽門(mén)螺桿菌 鐵蛋白 融合pcr
摘要：為獲得高活性的雞傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重組蛋白,本試驗(yàn)對(duì)IBDV VP2蛋白基因與能進(jìn)行自我組裝的幽門(mén)螺桿菌(Hp)鐵蛋白基因進(jìn)行融合PCR擴(kuò)增,獲得其融合基因。根據(jù)成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp鐵蛋白基因的堿基序列,設(shè)計(jì)合成2對(duì)引物,應(yīng)用融合PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得融合基因片段VP2-Fe。將目的基因克隆至pMD18-T載體篩選陽(yáng)性重組克隆質(zhì)粒,然后將目的基因亞克隆至真核表達(dá)載體pPICZaC后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞,篩選獲得陽(yáng)性表達(dá)質(zhì)粒。結(jié)果顯示,通過(guò)兩輪PCR擴(kuò)增出長(zhǎng)度為1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亞克隆至pMD18-T載體,測(cè)序結(jié)果顯示,融合基因無(wú)任何堿基的突變,篩選的陽(yáng)性質(zhì)粒命名為pMD-VP2-Fe。雙酶切回收目的基因大小為1 824 bp,亞克隆至pPICZaC,PCR和雙酶切鑒定出現(xiàn)預(yù)期大小的片段,將獲得的陽(yáng)性表達(dá)質(zhì)粒命名為pPICZaC-VP2-Fe。本研究為后期利用真核表達(dá)載體獲得其融合重組蛋白奠定基礎(chǔ)。
中國(guó)畜牧獸醫(yī)雜志要求:
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