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SiRNA干擾靶向抑制酪氨酸蛋白激酶Lck對哮喘小鼠T細胞功能的影響

季巧英 方雙燕 舒彩敏 楊瓊芳 宋東莉 鄭永華 東陽市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科 浙江省東陽322100 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院實驗研究中心

關(guān)鍵詞:rna 小分子干擾 

摘要:目的通過siRNA技術(shù)靶向抑制哮喘小鼠T細胞非受體酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表達,研究Lck特異性siRNA對哮喘小鼠T細胞功能的影響。方法化學(xué)法合成小鼠T細胞Lck基因21—23bp的RN段,以INTERFERinTMsiRNA Transfection Reagent作為轉(zhuǎn)染試劑,將合成的siRN段轉(zhuǎn)染哮喘小鼠脾臟來源的T細胞,作用48h后再與哮喘小鼠骨髓來源的樹突狀細胞(DC)混合反應(yīng)48h,收集細胞上清液,ELISA法檢測細胞因子IL4、IL-13、IL-2、INF-1;Western Blot法檢測T細胞Lck蛋白的含量,判斷其表達是否被沉默。結(jié)果siRNA干擾組T細胞中幾乎檢測不到Lck蛋白的表達,且其細胞上清液中IL-4、IL-13的水平(10.19±1.66、12.34±0.79)較非siRNA干擾組(28.06±2.88、27.87±1.61)及對照組(22.07±2.51、20.47±2.37)明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P〈0.01)。結(jié)論特定的21—23bp的RN段能夠以siRNA干擾的方式有效的抑制特定基因的表達,Lck特異性siRNA可以阻斷哮喘小鼠T細胞的激活和分化,減少哮喘炎癥因子的釋放。

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