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鴉膽子素A誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H460凋亡及機(jī)制的初步研究
關(guān)鍵詞：鴉膽子素 細(xì)胞凋亡 癌 非小細(xì)胞肺 h460細(xì)胞
摘要：目的考察鴉膽子素A(BA)對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞凋亡的影響和作用機(jī)制。方法用BA對(duì)H460細(xì)胞進(jìn)行處理,采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,并利用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)BA對(duì)H460細(xì)胞凋亡的影響。Hoechst 33342染色和免疫熒光染色觀察細(xì)胞凋亡時(shí)染色質(zhì)的凝集以及DNA損傷標(biāo)志蛋白γ-H2AX表達(dá)情況。Western blot和RT-PCR檢測(cè)H460細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果MTT結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,BA能顯著抑制H460細(xì)胞增殖。對(duì)A549、H1299、H1355三株非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系進(jìn)行抑制增殖作用檢測(cè),結(jié)果顯示BA對(duì)三株細(xì)胞系均有不同程度抑制作用。BA作用48h后,各濃度BA處理H460細(xì)胞凋亡率均高于對(duì)照組,具有時(shí)間依賴性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BA處理組可見(jiàn)明顯的染色質(zhì)凝集,細(xì)胞核碎片化,DNA損傷標(biāo)志蛋白γ-H2AX表達(dá)明顯增加。Western blot結(jié)果顯示,BA作用48h后,促凋亡蛋白Bax表達(dá)升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)降低,與對(duì)照組相比,Bax/Bcl-2比值顯著升高。同時(shí)與對(duì)照組相比,凋亡通路中的cleaved caspase-9、cleaved caspase-3表達(dá)明顯增加,并引起凋亡標(biāo)志蛋白PARP切割。RT-PCR結(jié)果顯示,BA處理H460細(xì)胞后,與對(duì)照組相比,Bcl-2基因表達(dá)顯著降低。結(jié)論BA能抑制人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H460細(xì)胞增殖,顯著誘導(dǎo)其凋亡,該作用與BA引起DNA損傷并激活線粒體凋亡通路有關(guān)。
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