時間:2022-11-20 01:15:30
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BMSCs向某一特定細(xì)胞的分化,必須依靠相應(yīng)微環(huán)境所提供的各種營養(yǎng)因子來完成。原始視網(wǎng)膜發(fā)育的微環(huán)境是最適宜的微環(huán)境,這種微環(huán)境提供了BMSCs定向誘導(dǎo)分化所具備的各種生長因子以及營養(yǎng)成分。人工誘導(dǎo)分化干細(xì)胞的方法,就是對這種微環(huán)境的模擬。模擬的準(zhǔn)確性越高,分化效率也就越高。
1.1單用誘導(dǎo)介質(zhì)
1.1.1堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF):堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)誘導(dǎo)方法是誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)元方向分化的經(jīng)典方法,其優(yōu)點是可以獲得較多的神經(jīng)元樣細(xì)胞,分化的陽性率為78%。劉東寧等[1]用bFGF誘導(dǎo)后結(jié)果與Woodbury一致。用bFGF誘導(dǎo)后細(xì)胞GFAP表達陰性,認(rèn)為主要是向成熟神經(jīng)元方向分化,而不是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。誘導(dǎo)后從形態(tài)學(xué)上在細(xì)胞間建立了突觸聯(lián)系,但誘導(dǎo)后細(xì)胞難以長期存活,需聯(lián)合其他神經(jīng)營養(yǎng)因子進行維持培養(yǎng),才利于長期存活。在培養(yǎng)中,劉東寧等用含10 ng/mL bFGF進行接觸性的誘導(dǎo),有報道是用20 ng/mL bFGF進行接觸性的誘導(dǎo)。
1.1.2乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞:采用新出生1~3天的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑。有學(xué)者把將視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)換液的上清液收集于干凈玻璃瓶中,真空抽濾后按2∶3比例與DMEM培養(yǎng)液混合后備用。用上述混合液進行BMSC細(xì)胞的誘導(dǎo)分化,倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長及分化情況。徐春玲等[2]是
將新出生1~3天的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞置于Transwell雙層培養(yǎng)板的上層,這些尚未成熟的視網(wǎng)膜組織內(nèi)尚存在一些促進原始視網(wǎng)膜干細(xì)胞分化和發(fā)育的細(xì)胞因子及細(xì)胞外基質(zhì)成分,可通過上層的濾膜孔擴散至下層的BMSCs周圍,而上層的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞卻無法濾過到BMSCs周圍,從而模擬了原始視網(wǎng)膜發(fā)育的微環(huán)境。BMSCs在此微環(huán)境中,分化為具有神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)特征的神經(jīng)樣細(xì)胞。實驗組誘導(dǎo)3d后,檢測到RGCs標(biāo)志物Nestin陽性細(xì)胞的表達,比率為30.9%±7.7%,但7d后表達減弱(23%±4%)。
1.1.3 activin A、?;撬岷捅砥どL因子(EGF):Anthony等[3]應(yīng)用activin A、?;撬岷虴GF體外誘導(dǎo)分化后,發(fā)現(xiàn)有20%~32%的細(xì)胞在體外可表達感光細(xì)胞特異標(biāo)志――視紫紅質(zhì)、視蛋白和recoverin。將MSC植入RCS大鼠視網(wǎng)膜下腔內(nèi),移植入視網(wǎng)膜下腔的MSC未表達細(xì)胞增殖的標(biāo)志,說明MSC在移植入視網(wǎng)膜下腔后經(jīng)歷的是分化的過程而非增殖。這與Kicic A實驗的結(jié)果一致。
還有,Woodbury等利用BME、DOSO、BHA為誘導(dǎo)劑將BMSCs誘導(dǎo)成為神經(jīng)樣細(xì)胞。還有人利用中藥,如人參、丹參、當(dāng)歸、黃芪等誘導(dǎo)BMSCs為神經(jīng)樣細(xì)胞。
2 借用支架培養(yǎng)
2.1三維支架的選擇
三維支架培養(yǎng)是組織工程中最典型的培養(yǎng)方式,使細(xì)胞間形成適宜的空間分布和細(xì)胞連接,而且為細(xì)胞提供特異性的生長和分化信號,形成與體內(nèi)相似的細(xì)胞生長微環(huán)境,引導(dǎo)組織形成。近年來,BMSCs的三維培養(yǎng)已用于骨、軟骨、肌腱和脂肪等組織的工程研究,其主要的支架材料為明膠海綿、水凝膠、β-磷酸三鈣及聚己內(nèi)酯等。但應(yīng)用在神經(jīng)元細(xì)胞上未見相關(guān)報道。
羊膜(human amniotic membrane,HAM)基質(zhì):王晶等[4]采用人的HAM基質(zhì)負(fù)載BMSCs定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞。在實驗中,觀察到BMSCs接種到HAM基質(zhì)上后能很快貼附生長,細(xì)胞活力好,折光性強,第3-10天可在HAM基
質(zhì)面密集生長,這與張妍等報道相同。王晶等則認(rèn)為,把HAM基質(zhì)作為細(xì)胞培養(yǎng)載體具有以下的優(yōu)點:HAM基質(zhì)主要成分為膠原纖維和網(wǎng)狀纖維,其三維支架結(jié)構(gòu)為神經(jīng)元樣細(xì)胞及其軸突的生長提供了廣闊的空間;HAM基質(zhì)免疫原性低,具有良好的生物相容性和抗炎性;HAM基質(zhì)內(nèi)的EGF、bFGF等多種生長因子為細(xì)胞的增生和分化提供了豐富的營養(yǎng)成分,HAM內(nèi)可能產(chǎn)生的某種未知的有很強神經(jīng)保護作用的因子,為神經(jīng)元樣細(xì)胞及其軸突的生長提供了更多的營養(yǎng)支持。
2.2三維支架的誘導(dǎo)劑
王晶等[4]以HAM基質(zhì)作為載體,以新出生1~3 d的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑進行非接觸培養(yǎng)。以HAM基質(zhì)為載體,以2-巰基乙醇(DMEM/F12)接觸培養(yǎng)將其誘導(dǎo)定向分化成神經(jīng)樣細(xì)胞。關(guān)于二種實驗方法的效果比較未見相關(guān)報道。也未見借用HAM基質(zhì)作為載體和單用乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑這二種誘導(dǎo)方式效果比較的相關(guān)報道。
3 BMSCs體內(nèi)移植實驗
BMSCs移植入體后,如何從受體辨別供體干細(xì)胞,并觀察其在體內(nèi)的遷移變化情況,一直是讓人困擾的問題。近年來,主要運用的標(biāo)記物有以下幾種。
3.1 超順磁性鐵納米顆粒(SPIO)。SPIO是研究發(fā)現(xiàn)的新型磁共振陰性對比劑,可在活體標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞。Frank等研究發(fā)現(xiàn)SPIO顆粒與轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合后標(biāo)記干細(xì)胞比使用單純SPIO顆粒高100倍。陳舒澤等[5]研究發(fā)現(xiàn),SPIO的濃度對此有至關(guān)重要的影響:濃度過低無法達到較高的標(biāo)記效率滿足MR的需要。在標(biāo)記濃度為11.2mg/L左右時,既能達到較高的標(biāo)記效率,又不影響視網(wǎng)膜前體細(xì)胞的體外生長增殖,但這與有些文獻報道不同。轉(zhuǎn)染劑結(jié)合SPIO并無短期或長期毒性作用。
3.2 溴脫氧尿嘧啶(BrdU)。BrdU是胸腺嘧啶類似物,移植的細(xì)胞與含有BrdU的培養(yǎng)基一起孵育,讓它取代胸腺嘧啶而摻入處于DNA合成期細(xì)胞的DNA中作為標(biāo)記,用免疫熒光或免疫組織化學(xué)顯示移植的細(xì)胞。BrdU作為標(biāo)記應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)臐舛?,采用質(zhì)量濃度為10μg/mL的BrdU標(biāo)記的了BMSCs與未做標(biāo)記的細(xì)胞生長情況基本相同,在熒光顯微鏡下可見BrdU標(biāo)記的MSCs細(xì)胞核被染色,未做標(biāo)記的細(xì)胞不著色。
3.3 細(xì)胞熒光黃(LY)。顯微鏡下選取誘導(dǎo)后1 d形態(tài)和活性良好的細(xì)胞,將細(xì)胞爬片置于灌流槽中。電極拉制器拉制玻璃毛細(xì)管微電極,注入電極液后電阻范圍為8~12mΩ。調(diào)節(jié)微操縱器,使電極尖端接近細(xì)胞,利用特定的測試方波電脈沖形成封接,在電極尖端接觸細(xì)胞表面之前,向微電極加正壓。當(dāng)接近細(xì)胞時,給予短暫負(fù)壓吸引。當(dāng)電極尖端與細(xì)胞膜表面形成1~5 gΩ封接電阻時,用力吸破電極尖端上的膜片,LY通過記錄電極尖端擴散入所記錄的細(xì)胞內(nèi),5~10min后,在Leica熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并拍片。
3.4 視網(wǎng)膜電圖。視網(wǎng)膜電圖是客觀有效地反映視網(wǎng)膜功能變化的一個敏感指標(biāo),b波反映了視網(wǎng)膜內(nèi)核層區(qū)域細(xì)胞的電活動,是視網(wǎng)膜缺血的敏感指標(biāo)。用視網(wǎng)膜電圖、b波觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞視網(wǎng)膜下移植對大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的影響。
3.5 熒光染料。4,6-二脒222苯基吲哚(DAPI)是一種藍色熒光染料,可被不同時期的細(xì)胞攝取并與DNA結(jié)合。把(DAP I)儲存液(Sigma)加入第2代BMSCs培養(yǎng)液中,至終濃度為50mg/L,37℃孵育染色1 h,Hanks平衡液沖洗6遍,消化、離心收集細(xì)胞,重懸于PBS中(106個/mL),置于冰上待用,然后采用標(biāo)記細(xì)胞直接在熒光顯微鏡下識別,陽性率達100%。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞密度與內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度是檢測視網(wǎng)膜損傷修復(fù)程度的常用指標(biāo)。用蘇木精-伊紅染色研究內(nèi)核層細(xì)胞結(jié)構(gòu)和排列情況,用尼氏染色是對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進行定量研究。還有用綠色熒光染料(PKH-67)標(biāo)記了BMSCs進行實驗。
4 動物模型與結(jié)果
4.1 正常模型
張枝橋等[6]把MSCs移植到同種異體成年大鼠視網(wǎng)膜下腔后14 d,主要分布于RPE層和視錐、視桿細(xì)胞層,證明MSCs能夠在視網(wǎng)膜下腔存活并能與原視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相融合;免疫熒光結(jié)果顯示,移植后的MSCs細(xì)胞并未表達光感受器細(xì)胞的特異性抗原Rhodopsin。對于這一陰性結(jié)果,認(rèn)為原因可能有以下兩點:一是由于實驗條件所限,觀察時間太短,移植后的BMSCs可能還來不及發(fā)生分化,這一點可在下一步的實驗中通過延長觀察時間來證實。二是本實驗選用的受體為正常的成年大鼠,正常成年大鼠的視網(wǎng)膜與新生大鼠視網(wǎng)膜及非健康的大鼠視網(wǎng)膜相比,后者的微環(huán)境更有利于移植細(xì)胞的遷移、整合、分化,在這一微環(huán)境中起主要作用的可能是一些生長因子,如bFGF、NGF、GDNF、BDNF和CNTF等。而在正常成年大鼠的視網(wǎng)膜中,這些生長因子的水平相對較低,對移植細(xì)胞產(chǎn)生的趨化作用較弱,不利于移植細(xì)胞的整合、分化。大鼠MSCs移植于正常和Nd:YAG激光損傷后的大鼠視網(wǎng)膜下5周,MSCs可與原視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相融合分布于RPE層、視細(xì)胞層、雙極細(xì)胞層及節(jié)細(xì)胞層,ERG檢測表明損傷移植組的b波水平高于對照組。
4.2 損傷模型
光損傷模型:張鈺等[7]光損傷模型的制作:除N組外的SD大鼠經(jīng)過24 h暗適應(yīng),被放入光損傷儀中(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部儀器廠制作)光照24 h,光照強度為(950±50)lx,波長為480~520 nm,光照后置于黑暗中3 d,此后恢復(fù)到正常光環(huán)境,并在視網(wǎng)膜下移植BMSCs,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),BMSCs可能是通過其分泌的細(xì)胞因子bFGF發(fā)揮其營養(yǎng)支持作用,從而對光感受器細(xì)胞產(chǎn)生保護作用,抑制了光損傷大鼠光感受器細(xì)胞的凋亡,但BMSC并沒有整合到大鼠視網(wǎng)膜組織中起替代作用。
注射3%NaIO3損傷RPE模型:在Lewis大鼠腹腔注射3%NaIO3(100mg/kg)建立大鼠RP模型,將體外培養(yǎng)的BMSCs植入視網(wǎng)膜下腔,術(shù)后第1周即可見BMSCs主要分布于RPE層和視錐、視桿細(xì)胞層,并從第3周開始表達RPE細(xì)胞及光感受器細(xì)胞的表面標(biāo)志,但尚未需從功能上進行驗證。龔莉華等[8]用同一方法研究發(fā)現(xiàn),誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達RPE細(xì)胞、光感受器細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志,但沒有整合入神經(jīng)視網(wǎng)膜層,也沒有證據(jù)支持其分化為光感受器細(xì)胞。
視網(wǎng)膜缺血再灌注動物模型:用血管結(jié)扎法建立視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型。即是分離、暴露視神經(jīng),在其根部用3/0滌綸線打活結(jié),60 min后拆除結(jié)扎線,恢復(fù)血流。缺血再灌注損傷后28 d后視網(wǎng)膜下移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組與非移植組相比,移植組視網(wǎng)膜電圖b波增高,組織結(jié)構(gòu)破壞不顯著,內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度顯著增厚,研究認(rèn)為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷有神經(jīng)保護作用,且該作用與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植有關(guān),而與磷酸鹽緩沖液無關(guān)。王陸飛等[9]眼缺血再灌注損傷的實驗?zāi)P褪窃谟已劢庆柲ぞ壌┐?,注入BSS平衡鹽溶液,用間接檢眼鏡觀察,當(dāng)眼內(nèi)壓上升到80 mmHg維持約60 min時,間接檢眼鏡下可見視網(wǎng)膜血管阻塞,視網(wǎng)膜變白,也可發(fā)現(xiàn)虹膜變白,此時終止眼內(nèi)灌注。以間接檢眼鏡確定血管再充盈后,用Br2dU標(biāo)記的BMSCs進行視網(wǎng)膜下移植。然后做了BrdU陽性細(xì)胞連續(xù)切片的免疫組化染色,發(fā)現(xiàn)BMSCs在視網(wǎng)膜下移植后有一部分參與了視網(wǎng)膜的重建,一部分參與了損傷的增生,還有一部分形成了新的節(jié)細(xì)胞層增生。BMSCs的參與可以緩解缺血對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷,具有向損傷部位遷移的能力。證明了BMSCs能夠在視網(wǎng)膜下存活并能與原視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相融合,初步判斷形成的視網(wǎng)膜樣結(jié)構(gòu)具有神經(jīng)細(xì)胞特性,但尚不能確定這種新形成結(jié)構(gòu)是否能夠建立一定的神經(jīng)傳導(dǎo)。
5 鑒定
鑒定指標(biāo)有以下幾種:(1)Nestin:為神經(jīng)巢蛋白,是神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白,屬于中間絲蛋白,只在多潛能的神經(jīng)外胚層細(xì)胞中表達,是神經(jīng)干細(xì)胞特有的生物學(xué)標(biāo)記。(2)生長相關(guān)蛋白(GAP-43):是一種細(xì)胞骨架蛋白,特異性地分布于神經(jīng)元胞體及突起中,是軸突成熟的標(biāo)志之一,國際上將GAP-43列為研究神經(jīng)生長發(fā)育和損傷修復(fù)等神經(jīng)可塑性的首選分子標(biāo)志物。(3)神經(jīng)絲(Neurofilament,NF):屬于中間絲家族的第Ⅳ型,廣泛分布于成熟神經(jīng)元中。(4)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物Thy111檢測。但大部分的學(xué)者只用其中一種或幾種:王晶等[4]用免疫組織化學(xué)方法測定分化所得細(xì)胞的Nestin、NF表達;或應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白Nestin、神經(jīng)元特異性標(biāo)記物GAP-43的表達;劉東寧等[1]則檢測Thy111表達。
6 討論
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化出視網(wǎng)膜神經(jīng)樣細(xì)胞為視神經(jīng)損傷等疾病的治療提供了新的方法。然而,由于對MSC來源的分化研究尚處于初級階段。盡管近年來對MSC的研究取得了很大進展,但仍然存在以下問題尚待解決:
(1)不同條件誘導(dǎo)骨骼間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化成視網(wǎng)膜細(xì)胞所需微環(huán)境的是否存在蛋白差異,未被證實。
(2)還未形成相對有統(tǒng)一的、高效的誘導(dǎo)劑與誘導(dǎo)方法,未形成相對統(tǒng)一條件培養(yǎng)劑。
(3)體內(nèi)實驗中損傷模型的仿真程度還未經(jīng)進行實驗證實。正常視網(wǎng)膜與病變視網(wǎng)膜以及不同病變視網(wǎng)膜間的微環(huán)境對移植細(xì)胞的影響有何不同?
(4)雖然檢測到了RGCs標(biāo)志物的表達,但未能在功能學(xué)以及電生理學(xué)等方面上證實視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞的功能。所以,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞其分化成的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞是否具有特定的功能,移植后與宿主神經(jīng)細(xì)胞整合發(fā)揮修復(fù)作用等尚有待進一步研究。
(5)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對光感受器細(xì)胞產(chǎn)生保護作用機制未明了。是通過其分泌的細(xì)胞因子發(fā)揮其營養(yǎng)支持作用,還是整合到大鼠視網(wǎng)膜組織中起替代作用,還在探討中。
雖然MSCs移植目前尚不能應(yīng)用于眼科臨床,但是已經(jīng)取得的研究成果表明MSCs移植有可能成為治療視網(wǎng)膜變性疾病的新的有效途徑。
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8、歲歲重陽,今又重陽,傲霜滿地香;久久思量,久久難忘,九九重陽勝春光;美酒一杯,秋雁兩行,福澤深厚又綿長。祝重陽快樂,永遠(yuǎn)健康!
9、我有一枝,但愿與你能共。溫馨問候在其中,真心朋友能懂?;ǜ汕樯盍x重,花瓣祝福重重。煩惱憂愁去無蹤,幸福健康相送!重陽快樂!
10、天高云淡香,遍插茱萸在廳堂。游子千里歸故鄉(xiāng),美酒一杯敬尊長。養(yǎng)育之恩不敢忘,祝愿福壽安康萬年長。重陽節(jié)到了。祝天下所有老人健康長壽!
女:親愛的爸爸媽媽們,老師們:
合:大家好!
男:歲歲重陽,今又重陽。在這金秋送爽,碩果累累的時節(jié),
我們迎來了又一個九九重陽節(jié)。
女:在此我們祝愿天下所有的老人們幸福安康!(鞠躬) 女:把已有近兩千年歷史的九九重陽節(jié)定為老人節(jié),展示了黨和政府對于老齡工作的關(guān)心和支持。
男:再過幾天就是你們的節(jié)日,
沒有昔日你們艱苦的創(chuàng)業(yè),哪來我們今天優(yōu)美的校園?
沒有昔日你們辛勤的付出,哪有我們今天幸福的生活?
女:XX中學(xué)為慶祝老人節(jié),組織舉辦本次活動,以此感謝對學(xué)校的發(fā)展和繁榮作出貢獻的老人們,同時向離退休老同志們致以崇高的敬意和美好的祝愿:愿你們青松不老,古楓吐艷,漫步人生夕陽紅!祝你們越活越精神,越活越年輕!
男:一、參加本次活動的學(xué)校領(lǐng)導(dǎo)有:書記校長XX、副校長XX、副校長XX、副校長XX、還有我們?nèi)w退休領(lǐng)導(dǎo)、退休教師和老師的爸爸和媽媽們,歡迎您們的到來(鞠躬)
女:二、《歲歲重陽,今又重陽》,有請XX老師誦詩致敬?。ū尘耙魳罚?/p>
男:三、下面掌聲有請XX校長重陽節(jié)致辭
女:四、下面有請退休教師代表發(fā)言
男:五、下面有請教師代表XX做感恩父母發(fā)言(背景音樂父親或母親)
女:六、文藝節(jié)目現(xiàn)在開始
男:八、美好的時光總是轉(zhuǎn)瞬即逝,歡樂的笑聲卻將永駐心田。愿我們的演出,能給你們留下美好的記憶,能給你們帶去溫暖與歡樂。
3、歲歲重陽,今又重陽,不似春光,勝似春光。重陽節(jié)快樂!
4、重陽將來到,快樂步步高。人間重晚晴,殷殷寸草心。霜葉紅勝花,歲歲好年華。莫道桑榆晚,幸福金不換。愿你重陽享安康,吉祥伴身旁。
5、年年有今日,歲歲有今朝,奉上九杯酒,甜美到永久,九九重陽節(jié),祝福我來送,甜蜜你來收,幸福儲存下,快樂轉(zhuǎn)發(fā)中。重陽節(jié)快樂!
6、九九重陽節(jié),登高遠(yuǎn)眺暢身心,愿你健康久久;賞菊飲酒祛災(zāi)禍,愿你幸福久久;品糕插萸辟邪難,愿你吉祥久久。
7、天邊樹若薺,江畔洲如月。何當(dāng)載酒來?共醉重陽節(jié)。我想和你共度重陽節(jié),我已備好了酒重陽糕,就等著你來了。
8、若有諍友,那就是如你對我那樣關(guān)懷的朋友。愿你擁有無窮無盡的幸福與歡樂,你的生活永遠(yuǎn)美好,我的摯友,祝重陽節(jié)快樂!
3、把陽光存起來,給你送去溫暖,把月光存起來,給你灑下安然,把燈光存起來,給你驅(qū)逐黑暗,把信息存起來,你就存起了永恒的祝愿。提前祝你重陽節(jié)快樂。
4、重陽節(jié)到了,出游賞景去除疲憊,登高遠(yuǎn)眺放松身心,遍插茱萸驅(qū)走災(zāi)禍,觀賞健康長壽。我祝你:重陽節(jié)開開心心,每一天快快樂樂。
5、只想在這個溫暖的節(jié)日里,祝愿我兩邊的父母都能身體健康,心情愉悅,雖不在你們身邊,我們思念和掛牽著你們就如同你們對我們的那樣。
6、重陽節(jié)到了,也沒啥好送你的,就送你一束吧??蓜e小看它,你可以用它釀成酒,飲后無憂愁;還可制成糕,吃后樂逍遙。重陽節(jié)快樂。
7、天空作信封,白云作信紙,流星是我的特快專遞。送你清風(fēng)讓你心曠神怡,送你細(xì)雨洗去你疲憊的汗跡,送你彩虹通向夢想之旅,祝你重陽節(jié)快樂。
8、相識相愛又相戀,重重陽關(guān)難阻擋。一腔相思情不移,兩廂牽掛志更堅。情緣來去實無奈,春秋過往太匆忙。只要有心又有意,冬天過后是春天。
3、重陽佳節(jié)珍貴,周末不能浪費。出門旅游太累,登高望遠(yuǎn)太貴?;丶倚⒕锤改?,享受親情安慰。嘗嘗媽媽手藝,美食值得回味。家庭和諧幸福,工作才不疲憊。
4、九九重陽佳節(jié),想約你一起來過節(jié),但一采就碎,菊酒一喝就醉,外出旅游太貴,登高遠(yuǎn)眺太累,不如發(fā)條微信經(jīng)濟又實惠,祝你重陽過得輕松愉快。
5、重陽佳節(jié)聚,九九登高望,望見祥云千里把您罩,望見您桌前食美果飄香,望見您兒孫繞膝幸福享,望見您歲歲安樂享重陽。
6、重陽節(jié)到了,不管三七二十一,還是九九八十一,平安才是唯一。年齡存進銀行,健康就是利息;重陽當(dāng)成六一,七十也變十七。祝您心情永遠(yuǎn)美麗。
7、歲歲重陽,今又重陽,誰道秋日涼?重陽節(jié)里歌聲放,祝福飛來心飛揚。九月九里共舉杯,聲聲祝福暖心扉。微信送到你這里,祝福也能化傷悲。
8、年年歲歲花相似,歲歲年年人不同,重陽節(jié)到了,親朋好友聚在一起賞菊插茱萸,體味一年一年大家的經(jīng)歷與心情,祝愿大家身體健康,重陽節(jié)快樂。
“人生易老天難老,歲歲重陽,今又重陽,戰(zhàn)地黃花分外香。”光陰似箭,日月如梭。轉(zhuǎn)眼到了重陽,我要懷著感恩的心謝謝奶奶。
重陽節(jié)到了,這是老人的節(jié)日。想到奶奶常常給我們好吃的,過年的時候給我們豐厚的壓歲錢,生病時無微不至的照顧我們,晚上讓我們吃熱騰騰的飯菜……他們是如此的疼愛我們。今天我要去陪陪她。奶奶從地里回來,累的滿頭大汗,我給她倒一杯水,遞到她的手上。奶奶笑瞇瞇的說:“孫女兒,你長大了。”我甜甜的笑了:“奶奶,節(jié)日快樂。”奶奶聽了,笑得像年輕的小姑娘,真美。
祝愿天下的老人重陽節(jié)快樂。
作者:池州市東至縣大渡口鎮(zhèn)中心小學(xué)304班曹敏
指導(dǎo)老師:童心樂作文英語培訓(xùn)中心張老師
老師們、同學(xué)們,早上好!
今天我發(fā)言的主題是:重陽盡孝心,楓紅愛更濃。
楓葉正紅時,又是重陽節(jié)。再過幾天就到重陽佳節(jié)了??赡苓€有同學(xué)不知道重陽節(jié)的來歷吧?重陽節(jié)就是農(nóng)歷九月初九,為什么會是九月初九呢?古老的《易經(jīng)》把“六”定為陰數(shù),把“九”定為陽數(shù),九月初九,日月并陽,兩九相重,故而叫重陽,也叫重九。九九重陽,因與“久久”同音,九在數(shù)字中又為最大數(shù),故有長久、長壽之意,故且秋季也是一年中收獲的黃金季節(jié),其寓意就深遠(yuǎn)了。1989年起,重陽節(jié)又被賦予了新的含義,被國家定為敬老節(jié),成為人們尊老、敬老、愛老、助老、盡孝道表孝心、弘揚傳統(tǒng)美德的節(jié)日。
老師們、同學(xué)們!普天之下的每一位慈母嚴(yán)父,都值得尊敬,值得愛戴。當(dāng)歲月的痕跡悄悄爬上那嬌美的容顏,當(dāng)山一樣偉岸挺拔的腰身漸漸佝僂,當(dāng)曾經(jīng)火紅的青春悄然離他們遠(yuǎn)去,他們卻沒有絲毫遺憾,沒有任何抱怨。他們用那無私的奉獻和深沉的愛心,撫育著我們成長,包容著我們的錯誤。我們的平安,我們的健康,我們的成功,我們的幸福……我們在人生之路上取得的點點滴滴的成績,都包含著慈母嚴(yán)父那沉甸甸的愛!可是,我們又給與了父母什么?我們的父母一生都在毫無保留地付出,卻從沒想過要得到任何回報!在這個重陽節(jié),難道我們不應(yīng)該為父母做些什么嗎?來吧,用最樸素的方式獻給父母一份孝心;拿起你手中的筆,寫幾句感恩的話語;舉起你的手,為父母捶兩下背、揉幾下腰、洗一下腳;拿起你的相機,給父母留下一份美好的回憶!只要我們真心的做了,你就能得到一筆珍貴的財富!
老師們、同學(xué)們!快行動起來吧!關(guān)愛老人,始于足下;孝敬父母,從我做起,從小做起,從心做起!
企業(yè)機關(guān)重陽節(jié)領(lǐng)導(dǎo)發(fā)言稿范文二
尊敬的各位老領(lǐng)導(dǎo),同志們:
歲歲重陽,今又重陽。今天,我們與各位老領(lǐng)導(dǎo)、老同志歡聚一堂,共慶我國傳統(tǒng)節(jié)日重陽佳節(jié),感到由衷的高興。在此,我代表區(qū)委辦公室全體職工向你們表示節(jié)日的慰問,并致以崇高的敬意!
我雖然有多年在區(qū)政府辦公室工作的經(jīng)歷,但對區(qū)委辦公室的工作,較為陌生,可以說還是一名新兵。我也深知,區(qū)委辦公室所取得的每一點成績和進步,都離不開各位老領(lǐng)導(dǎo)的關(guān)心、理解和支持。在這里,我也希望各位老領(lǐng)導(dǎo)、老同志一如既往地關(guān)注區(qū)委辦公室,為我們工作把關(guān)定向。我們一定以各位老領(lǐng)導(dǎo)為榜樣,繼續(xù)保持和發(fā)揚黨的優(yōu)良傳統(tǒng)和作風(fēng),不斷推進區(qū)委辦公室工作。
人生易老天難老,今也重陽明也重陽,歲歲重陽;容顏易變情難變,早也想念晚也想念,天天想念;歲月易失友難失,朝也問候夕也問候,時時問候。重陽快樂。
人生易老情難老,歲歲重陽,今又重陽,知交故友憶如常;一年一度秋風(fēng)勁,季節(jié)在長,思念在長,友情如酒菊更香。九九重陽,祝愿你節(jié)日快樂、幸福滿堂!
人生是場旅行,總有些難忘的風(fēng)景;相逢是那樣美妙,相知是那樣美好;工作固然重要,心情也要調(diào)好;偶爾發(fā)個祝福短信,算是給你重陽問好!
人生路上大步走,走到重陽九月九,心中懷念老朋友,多日不曾在聚首,心中思念常常有,一句祝福說出口,愿你天天都優(yōu)秀,快樂幸福最永久!
人生百味。凄冷的日子里,溫暖是心中的家,孤獨的日子里,關(guān)懷是心中的家,漂泊的日子里,朋友是心中的家,重陽佳節(jié)的日子里,我的問候是你永遠(yuǎn)的家。
讓幸福鋪成一張紙,用開心做的墨汁,繪出美好的生活。讓健康的五線譜,配上平安的音符,唱出幸福的歡樂。把糯米磨成粉,用吉祥去搗,吃出重陽的美好!
讓喜羊羊給你帶去聰明,讓懶羊羊給你帶去愜意,讓美羊羊給你帶去漂亮,讓沸羊羊給你帶去勇敢,讓暖羊羊給你帶去溫度,最后讓重陽節(jié)給你帶去開心快樂。
讓秋風(fēng)帶去我的問候,讓秋菊綻放我的關(guān)懷,讓秋雨訴說我的思念,讓短信送上我的問候:又到九九重陽,在這個吉利的日子里,祝你開心、快樂!
讓南山上的空氣幫你潤肺,讓解放碑的輕軌載你騰飛,讓瓷器口的雞雜給你美味,讓太白酒的清香把你迷醉,也讓我的祝福帶給你實惠:重陽節(jié)快樂!
秋陽撒金光,漫山黃。茱萸插鬢角,米糕抹額旁。登高祈福祉,把酒訴衷腸。少年步步高,老人福壽長。愛情到久久,快樂在重陽。節(jié)日快樂!
秋天是一個多思的季節(jié),牽系著想你的心靈。窗前風(fēng)干的落葉是記憶的書簽,是整個秋天的精美收藏,我沉醉在詩的意境里,把對你重陽的祝福埋藏在心靈深處!
秋天晴空萬里,秋雨綿綿無期,秋雁向南飛去,秋葉零落成泥,秋水奔流不息,秋思濃濃想你,夜里睡覺記得蓋被,重陽登高記得添衣,重陽節(jié)快樂!
秋天來了,豐收的時候還會遠(yuǎn)嗎?重陽來了,團聚的日子還會遠(yuǎn)嗎?愿我的朋友笑容燦爛,每天都有一個好心情。拋開煩惱,時刻都能開開心心。
秋天的色彩,是那陽光般的金黃,比春天的綠色多了一份成熟,更多了一份喜悅,在這霜天季節(jié)里,顯得奪目異常,重陽節(jié),祝愿您健康長壽,成就夢想!
秋天到,重陽到,茶里品味到;九九來,喜慶來,祝你重陽好運來。愿你今朝重陽今朝樂,明朝依舊笑春風(fēng),歲歲平安精神好,時時福氣樂淘淘。
秋水長天晚生風(fēng),寒雁一向南飛去,游人幾度賞花叢,爭艷芳菲季,短信一條獻上禮,夕陽無限秋光好,幸福健康屬于你。重陽快樂。