導言：作為寫作愛好者，不可錯過為您精心挑選的10篇大一學習計劃書，它們將為您的寫作提供全新的視角，我們衷心期待您的閱讀，并希望這些內(nèi)容能為您提供靈感和參考。

篇1

聲樂班以提高學生的音樂綜合素質(zhì)與興趣為目的，通過形象生動的教學形式，使學員了解歌唱基本原理，掌握一定的音樂基礎知識和歌唱的基本技能，激發(fā)學員熱愛音樂藝術，培養(yǎng)學員正確的審美意識與積極、健康、活潑、向上的審美情趣。教學內(nèi)容包括基本歌唱發(fā)聲技巧、視唱練耳、基本樂理、歌唱表演，歌唱姿態(tài)與舞臺風度。

二、 輔導方法：

統(tǒng)一視唱練耳練習：每周一中午12點40，教學樓108教室，由王老師統(tǒng)一帶領練習；或由器樂組同學幫助在飯?zhí)萌龢乔俜烤毩暋?/p>

聲樂組成員自主練習時間：每周2晚7點在飯?zhí)萌龢乔俜浚ǔ蓡T也可以根據(jù)自己的實際情況在課外活動時間練習）。

訓練統(tǒng)一發(fā)音位置，練習合理呼吸，咬字吐字清晰，聲音獨立穩(wěn)定。練習曲以簡到難，有小到大，循序漸進。

三、小組成員的考核：

篇2

關鍵詞：頭頂一顆株； 學習； 記憶； 抗氧化酶； 超氧化物歧化酶； 谷胱甘肽過氧化物酶

Effects of Trillium tschonoskii Maxim on Learning and Memory and Anti-oxidase in Rats

Abstract：ObjectiveTo study the effect of Trillium tschonoskii Maxim injection on the learning and memory and on the expression of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) in serum， liver， kidney， hippocampus， cortex of aging rats.MethodsRats were randomly pided into five groups， control group， model group， Trillium tschonoskii maxim injection small dose group， middle dose group and large dose group. Rat model of acquired memory deficiency induced with haloperidol was employed. Electricity stimulated jumping stand was used for observation on rat behavior change and meanwhile concentrations of SOD and GSH-Px in different organs of the animal were detected.ResultsIn contrast with model groups， Trillium tschonoskii maxim injection at different dosage could maintain learning and memory， significantly increase the concentrations of SOD and GSH-Px in different tissue of the rats.(P

Key words：Trillium tschonoskii Maxim; Learning； Memory； Anti-oxidase； Superoxid dismutase; Glutathione peroxidase

頭頂一顆株又稱延齡草Trillium tschonoskii Maxim，為百合科延齡草屬植物，以根入藥，含有薯蕷皂素、甾醇、甾酮等化學成分，具有鎮(zhèn)靜、止痛、止血作用，主要用于治療眩暈頭痛、神經(jīng)衰弱、跌打損傷、月經(jīng)不調(diào)、崩漏等疾?。?］。 現(xiàn)代醫(yī)學研究認為，中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能退行性病變是人體衰老的關鍵，并與代謝產(chǎn)生的氧自由基（oxygen free radicals）慢性損傷或抗氧化酶不足密切相關。本實驗用頭頂一顆株注射液腹腔注射，通過對各組大鼠行為學觀察和組織SOD，GSH-Px含量測定，探討頭頂一顆株注射液對大鼠學習記憶能力及抗氧化酶的影響，從而進一步探討其改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抗衰老作用機制。

1 材料與方法

1.1 頭頂一顆株注射液制備頭頂一顆株由恩施中藥材生產(chǎn)GAP（質(zhì)量管理規(guī)范）示范基地提供，采用水提醇沉法制成含生藥30%的注射液，瓶裝密封消毒備用。

1.2 藥品與儀器氟哌啶醇注射液(湖南洞庭藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))， SOD、GSH-Px試劑盒（由南京建成生物工程研究所提供），回避反應箱（由華中科技大學同濟醫(yī)學院病理生理系提供），GL-20G II型高速低溫離心機，UV-2450分光光度儀，水浴箱。

1.3 電跳臺行為學訓練及測試實驗裝置為30 cm×30 cm回避反應箱，箱底為銅柵，可通刺激電流。另有一高5 cm，頂端直徑為5 cm的橡膠圓臺作為避電擊平臺，固定放置在箱內(nèi)一角的銅柵上，大鼠可在圓臺上停留以回避電擊。實驗開始時，先將大鼠輕放于回避反應箱內(nèi)，使其適應3~5 min，以消除探究反應。爾后底部銅柵通電（36 V）2 s，大鼠在受電擊刺激中逐漸學會跳上平臺回避電擊。多數(shù)大鼠可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊后又重新跳回平臺，如此訓練3 min，并記錄每只鼠受電擊數(shù)或犯錯次數(shù)，以此作為學習成績。末次給藥后，再測試行為學改變，記錄3 min各鼠跳下平臺的錯誤次數(shù)和第一次跳下平臺的潛伏期。

1.4 動物分組與用藥雄性Wistar大鼠50只，鼠齡40~50周，體重300~350 g，由華中科技大學同濟醫(yī)學院動物中心提供。隨機分為對照組、模型組、頭頂一顆株高劑量組、中劑量組和低劑量組，每組10 只。模型組按1 g/kg體重腹腔注射氟哌啶醇注射液，頭頂一顆株高、中、低劑量組分別在注射氟哌啶醇的同時，按7.2，3.6，1.8 g/kg體重腹腔注射頭頂一顆株注射液，對照組每天等量腹腔注射生理鹽水，Bid，連續(xù)用藥7 d。

1.5 組織SOD，GSH-Px測定行為學測試結束后斷頸處死大鼠，迅速取血及各種組織，血液離心取血清，組織制成10%勻漿，備用。SOD，GSH-Px測定，按試劑盒說明書進行，蛋白定量采用雙縮脲法測定。

1.6 統(tǒng)計方法所有結果都用SPSS統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料用±s表示，在對數(shù)據(jù)進行分析的過程中，發(fā)現(xiàn)個別數(shù)據(jù)不符合ANOVA比較的要求，而用非參數(shù)進行比較分析。

2 結果

2.1 頭頂一顆株對大鼠學習記憶能力的影響 電跳臺行為學測試結果顯示，頭頂一顆株各劑量組與模型組比較均能延長實驗大鼠的跳臺潛伏時間，減少3 min犯錯次數(shù)， 高、中劑量尤其明顯(P

2.2 頭頂一顆株對大鼠血及組織SOD，GSH-Px影響從表2和表3可見：頭頂一顆株注射液各劑量組與模型組比較均能提高血液、海馬、腦皮質(zhì)及肝腎SOD，GSH-Px表達值，高、中劑量組作用明顯(P

表1 頭頂一顆株對大鼠學習記憶能力的影響（略）

與模型組比較，*P

表2 頭頂一顆株對大鼠血及組織SOD的影響（略）

與模型組比較，*P

表2 頭頂一顆株對大鼠血及組織GSH-Px的影響 （略）

與模型組比較，*P

3 討論

衰老（Senility）是人體一種全身性生理變化過程，各系統(tǒng)、器官、組織和細胞都會出現(xiàn)這種過程，其機制復雜，并與多種因素有關。Lustbader等研究發(fā)現(xiàn)，阿爾茨海默病的發(fā)病機制與氧化應激有關，氧化應激通過氧自由基損傷神經(jīng)元細胞，促進神經(jīng)元細胞凋亡或死亡，引起神經(jīng)系統(tǒng)功能減退［2］。SOD和GSH-Px是重要的抗氧化酶系，普遍存在于人體各組織中，包括血液、肝臟、線粒體和細胞質(zhì)，有對抗自由基損傷和清除氧自由基、降低細胞內(nèi)H2O2水平、減少自由基和過氧化物蓄積的作用。氧自由基被SOD轉(zhuǎn)變?yōu)镠2O2后，GSH-Px可繼續(xù)作用在H2O2上，使之轉(zhuǎn)變成完全無害的水和氧。因此SOD，GSH-Px表達變化，已成為檢測衰老因素最為敏感和可靠的指標［3］。已有實驗研究報道，根據(jù)氟哌啶醇可使實驗動物產(chǎn)生僵住癥(強直性昏厥，catalepsy)的原理，用氟哌啶醇進行大鼠腹腔注射，對SOD和GSH-Px有抑制作用，是很好的動物老化造模劑［4］。本實驗用氟哌啶醇造模，觀察、探討頭頂一顆株對大鼠行為學變化及在不同組織對SOD，GSH-Px表達作用的影響，結果表明：頭頂一顆株能維持實驗大鼠學習記憶能力，顯著提高實驗大鼠血、肝、腎、海馬、腦皮質(zhì)SOD，GSH-Px表達量，具有上調(diào)抗氧化酶表達、改善記憶抗衰老作用。

參考文獻：

［1］ 謝宗萬，范崔生，朱兆儀，等. 全國中草藥匯編，第2版［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：225.

篇3

1 材料與方法

11 黨參注射液制備

富硒板黨［恩施板橋鄉(xiāng)中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GAP)示范基地］。采用水提醇沉法制成含生藥30％的注射液，瓶裝密封消毒備用。用雙道束原子熒光光譜法測定硒的含量為072?μg/ml。

12 藥品及實驗儀器

氟哌啶醇注射液(湖南洞庭藥業(yè)股份有限公司)；SOD、GSHPx試劑盒(南京建成生物工程研究所)；回避反應箱(華中科技大學同濟醫(yī)學院自制)；GL20G II型高速低溫離心機，UV2450分光光度儀，水浴箱。

13 大鼠電跳臺行為學訓練及測試

跳臺實驗參照文獻〔3〕進行。末次給藥15?min后將大鼠輕放于回避反應箱內(nèi)訓練，適應環(huán)境3?min，隨后底部銅柵通電(36V)2?s，訓練時間為3?min。24?h后再進行行為學測試，記錄各鼠第一次跳下平臺的潛伏期和3?min跳下平臺的錯誤次數(shù)。

14 實驗動物分組

雄性Wistar大鼠50只，鼠齡40～50周，體重300～350?g(華中科技大學同濟醫(yī)學院動物中心)，隨機分為對照組、模型組、富硒板黨高劑量組、中劑量組和低劑量組，每組10只。模型組按1?g/(kg·bw)腹腔注射氟哌啶醇注射液，富硒板黨高、中、低劑量組分別在注射氟哌啶醇的同時，按72，36，18?g/(kg·bw)腹腔注射富硒板黨注射液，對照組每天等量腹腔注射生理鹽水，各組用藥為2次/d注射，連續(xù)用藥7?d。實驗動物造模參照文獻〔4〕。

15 SOD、GSHPx測定

行為學測試結束后斷頸處死大鼠，迅速取血及各種組織，血液離心取血清，組織制成10％勻漿，備用。SOD、GSHPx測定，按試劑盒說明書進行，蛋白定量采用雙縮脲法測定。

16 統(tǒng)計分析

采用SPSS115統(tǒng)計軟件進行方差分析(ANOVA)，計量資料用均數(shù)加減標準差表示，對不符合ANOVA的數(shù)據(jù)，用非參數(shù)檢驗(KruskaiWallis Test)進行比較分析。

2 結果

21　富硒板黨對大鼠學習記憶能力的影響

富硒板黨各劑量組與模型組比較均能延長實驗大鼠的跳臺潛伏時間，減少3?min犯錯次數(shù)，高、中劑量尤其明顯(P

22 富硒板黨對大鼠血及組織SOD、GSHPx影響

富硒板黨注射液各劑量組與模型組比較均能提高血液、海馬、腦皮質(zhì)及肝腎SOD、GSHPx表達值，高、中劑量組作用明顯(P

3 討 論

多數(shù)學者認為，體內(nèi)自由基的濃度與學習記憶功能密切相關，隨著年齡的增加，由于抗氧化酶活性不斷下降，體內(nèi)產(chǎn)生的過量氧自由基無法及時清除，造成細胞代謝和功能形態(tài)的改變，導致細胞的衰老。SOD和GSH-Px是重要的抗氧化酶系，能清除氧自由基、降低細胞內(nèi)H2O2水平、減少自由基和過氧化物蓄積導致的細胞毒性作用〔5〕。肖本見等研究表明，富硒板黨能減弱苯異丙腺苷致小鼠學習記憶障礙，對小鼠具有益智和抗氧化作用〔6〕。本實驗結果表明，富硒板黨能減弱氟哌啶醇致大鼠的學習記憶障礙，維持實驗大鼠學習記憶能力，顯著提高實驗大鼠血、肝、腎、海馬、腦皮質(zhì)SOD、GSHPx的表達量，與肖本見等〔6〕的研究一致，說明富硒板黨具有清除氧自由基、改善記憶抗衰老、預防老年性癡呆等作用。其作用機制可能與富硒板黨所含膽堿、多糖及微量元素硒有關。為進一步開發(fā)及其臨床應用、健康保健等方面提供了藥理學實驗依據(jù)。

【參考文獻】

〔1〕殷智.黨參商品名稱辨析［J］.湖北中醫(yī)雜志，2001，23(11)：49-50.

〔2〕肖培根.新編中藥志［M］.北京：化學工業(yè)出版社，2001，1：811-812.

〔3〕H Gerhard vogel(著)，杜冠華(譯).藥理學實驗指南—新藥發(fā)現(xiàn)和藥理學評價［M］.北京：科學出版社，2001：444-445.

篇4

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.07.015

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2013）07-0038-05

Change of Capillary Pericapillary Cells in Rats with Myocardial Infarction and Effect of Supplementing Qi and Activating Blood Circulation Herbs HUANG Kun， YANG Dan-dan， GUO Shu-wen， SUN Qing， ZHANG Lu， QI Xin， WAN Ting， ZHENG Cheng-long （Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029 ， China）

Abstract：Objective To observe the change of capillary pericapillary cells in rats with myocardial infarction and the influence of supplementing qi and activating blood circulation herbs， and explore its mechanism of improving myocardial perfusion. Methods The rat model was established by ligaturing the left anterior descending coronary artery. On the base of ECG evaluation， successfully modeled rats were randomly divided into the model group， group treated with supplementing qi and activating blood circulation Chinese medicine （activating blood and supplementing qi group）， group treated with Perindopril （Perindopril group）， group treated with Tongxinluo Capsules （Tongxinluo group）. The sham-operation group was taken as the control. There were totally 5 groups. The model group and the sham-operation group were treated with normal saline. The changes of myocardial capillary density （MCD） and number of pericapillary cells on the 7th， 28th day after medicinal administration were observed. Results On the 7th and 28th day， the MCD decreased significantly and the number of capillary pericapillary cells increased significantly in the model group compared with the sham-operation group （P

Key words：supplementing qi and activating blood circulation herbs；myocardial capillary density；number of pericapillary cells；myocardial infarction；rats

研究顯示，心肌梗死患者雖然經(jīng)過搭橋或支架置入術后使梗死相關冠脈再通，或經(jīng)冠脈造影證實已達TMI3級血流的梗

基金項目：國家自然科學基金（81173142）

通訊作者：郭書文，E-mail：

死相關血管，有超過25%的患者心肌組織水平的血流灌注并未恢復[1]。因此，減少缺血心肌再灌注損傷、保持心肌微血管的完整性、改善缺血心肌血供狀態(tài)、恢復心肌細胞功能，是目前研究的熱點問題。

前期的系列研究結果顯示，益氣活血方能明顯促進大鼠缺血心肌微血管生成而改善心肌缺血，并能抑制心肌細胞凋亡，對相關蛋白及細胞因子有顯著調(diào)節(jié)作用[2-4]。本研究采用結扎冠狀動脈的方法建立大鼠急性心肌梗死后心衰模型，利用免疫組織化學方法觀察模型大鼠心肌毛細血管周細胞的變化，以及益氣活血中藥對其的影響，進一步探討益氣活血中藥改善心肌血流灌注的作用機制。

1 實驗材料

1.1 動物

健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量（200±20）g，清潔級，8周齡，中國科學院動物研究所提供，許可證號：SCXK（京）2012-0001。

1.2 藥物

益氣活血藥由黃芪、人參、當歸、川芎、三七粉等組成。根據(jù)前期研究結果[5-6]選擇益氣活血藥（2∶1）的劑量組合[5-6]。依口服劑工藝制備，按處方比例稱取中藥材，加9倍量水，煎煮2次，每次2.5 h，共5 h，水煎液過濾，濃縮，加乙醇調(diào)含醇量至50%，過濾，回收乙醇，過濾，調(diào)整濃度為相當原藥材2 g/mL，北京中醫(yī)藥大學藥廠提供。

對照藥物選用通心絡膠囊，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號110723-120116；培哚普利片，施維雅（天津）制藥有限公司，批號P2009971052951。

1.3 試劑與儀器

BA3414 兔抗鼠CD34抗體（武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品），BM0002小鼠抗α-SMA抗體（武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品），血清內(nèi)皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO），南京建成生物工程公司提供。RSP1002型小動物呼吸機（Kent Scientific Corporation）。

2 實驗方法

2.1 造模

采用左冠狀動脈前降支結扎方法[7]。用1%戊巴比妥鈉腹腔注射（40 mg/kg）麻醉后，背位固定，行氣管插管，連接小動物呼吸機，在左側(cè)第3、4肋間切開皮膚，鈍性分離肌層，打開胸腔，用開胸器推開胸腺擴大手術視野，充分暴露心臟，用帶線縫合針在左心耳與肺動脈圓錐之間于左心耳下約2 mm處，無張力的狀態(tài)下將左前降支連同少量的心肌組織一起結扎，然后迅速將心臟復位，關閉胸腔。全部手術過程在30 min內(nèi)完成，嚴格無菌操作。術后連續(xù)3 d肌肉注射青霉素預防感染。以結扎部位以下心肌變灰白、搏動減弱、心電圖肢體導聯(lián)出現(xiàn)ST段弓背向上明顯抬高為造模成功的標志。假手術組手術過程相同，僅繞過左冠狀動脈，打松結。

2.2 分組與給藥

將大鼠按隨機數(shù)字表法分為假手術組、模型組、中藥組、培哚普利組、通心絡組。

各組于造模的第1日開始分別灌胃相應藥物，每日1次。通心絡組每日給予通心絡膠囊30 mg/kg體質(zhì)量，培哚普利組每日給予培哚普利片0.72 mg/kg體質(zhì)量，益氣活血組每日給予益氣活血中藥21 g/kg體質(zhì)量[5-6]。各干預藥物均溶于無菌蒸餾水中，在保證藥物劑量的前提下，調(diào)整濃度使每只動物給藥容積均為10 mL/（kg?d）。假手術組和模型組每日以相同容積無菌蒸餾水灌胃。連續(xù)灌胃28 d。

2.3 標本采集

稱取大鼠體質(zhì)量，用1%戊巴比妥鈉麻醉，剪開腹腔，從腹主動脈取血，分離出血清待測。然后剪斷肋骨和胸肌，暴露胸腔取出心臟，用生理鹽水洗去血污，剔除血管、脂肪等非心肌組織，從左心室最大橫徑處切開，將切好的下半部分心臟放入預先準備的4%多聚甲醛液中固定備用，進行常規(guī)組織學方法處理，制作石蠟切片。據(jù)各組大鼠在實驗過程中的成活數(shù)量分別觀察第7、28日2個時間點指標的變化情況。

2.4 心肌病理形態(tài)學觀察

將心肌組織用不同濃度酒精梯度脫水，二甲苯透明，浸蠟、包埋、切片，脫臘，二甲苯透明，HE常規(guī)染色，梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹膠封固，光學顯微鏡觀察。

2.5 心肌毛細血管密度

石蠟切片脫蠟至水；3%過氧化氫室溫孵育8 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性；蒸餾水沖洗3次（每次2 min），電爐加熱沸騰后斷電，間隔7 min，反復2次，冷卻后PBS（pH 7.2～7.6）洗滌2次，滴加5%牛血清白蛋白封閉液，室溫20 min，甩去多余液體，滴加CD34一抗（濃度為1∶100），4 ℃過夜，第2日早晨滴加生物素山羊抗小鼠IgG，室溫20 min，PBS洗3次（每次2 min），滴加SABC，室溫20 min，PBS洗4次（每次5 min），DAB顯色，取1 mL蒸餾水，A、B、C試劑各加1滴，混勻后加至切片，室溫顯色，鏡下控制時間，蒸餾水沖洗，蘇木素輕度復染，1～2 s即可，梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2.6 免疫組化染色法檢測周細胞

石蠟包埋，切片（厚度4 ?m，每只鼠各取3張切片），脫蠟，高溫高壓抗原修復，噴氣后計時2 min，自然冷卻，水洗。4 ℃下于1∶300 α-SMA單克隆抗體孵育24 h，每張切片滴加50 ?L EnVisionTM試劑，室溫下孵育30 min。滴加新鮮配制的顯色劑（DAB），蘇木素復染。顯微鏡下觀察，胞漿顯棕黃色者為陽性細胞。按下法計數(shù)：先在100×視野下隨機選擇血管密度高的5個區(qū)和血管密度低的5個區(qū)作為計數(shù)部位，后在400×視野下計數(shù)微血管旁胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒的周細胞數(shù)，每只大鼠計數(shù)20個視野，最后以平均每個視野（400×）的周細胞數(shù)表示。小動脈平滑肌細胞亦為α-SMA陽性表達，根據(jù)血管壁厚度及結構可與周細胞相區(qū)別，此類陽性細胞不在計數(shù)范圍內(nèi)。

2.7 血清內(nèi)皮素-1、一氧化氮測定

采用雙抗體夾心ELISA法測定各組大鼠血清ET-1、NO的變化，具體方法嚴格按試劑盒說明操作。根據(jù)各組大鼠在實驗過程中的成活數(shù)量分別觀察第7、28日2個時間點指標的變化情況。

3 統(tǒng)計學方法

用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析。一般資料采用描述性分析，計量資料以―x±s表示，計數(shù)資料以頻數(shù)及百分數(shù)描述；多個樣本計數(shù)資料用χ2檢驗，計量資料符合正態(tài)性分布采用t檢驗，如不符合正態(tài)性分布采用非參數(shù)檢驗，比較各項指標在治療前后之間的差異，多組間差異性統(tǒng)計采用方差分析，若方差不齊，則用Games-Howell分析，雙側(cè)檢驗。P

4 結果

4.1 模型建立情況

采用冠狀動脈結扎法致大鼠急性心肌梗死后，肢導Ⅱ?qū)?lián)心電圖ST段呈弓背向上抬高，缺血心肌很快變蒼白色。共手術100只，造模成功81只，死亡19只，其中手術中死亡8只，急性心肌梗死造模成功后24 h內(nèi)死亡3只，給予藥物治療后死亡3只，注射麻藥后行心臟超聲檢查后死亡5只，死亡原因為呼吸停止、室顫和大出血，造模成功率81.0%。第7日觀察大鼠42只，第28日觀察大鼠39只。

4.2 各組大鼠心肌形態(tài)學觀察

第7日：假手術組大鼠心外膜未見纖維素滲出及未見炎細胞浸潤；模型組心肌梗死區(qū)炎癥反應明顯，有泡沫狀組織細胞聚集，大量中性粒細胞浸潤，心肌纖維斷裂、排列紊亂，壞死的心肌組織由新生的肉芽組織取代；梗死區(qū)邊緣有充血、出血及炎細胞帶，心外膜有炎性及纖維素性滲出物。培哚普利組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小。通心絡組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，較培哚普利組病變范圍小。益氣活血組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，較培哚普利組及通心絡組病變范圍較小。見圖1。

第28日：假手術組大鼠心外膜未見纖維素滲出及未見炎細胞浸潤。模型組大鼠心肌梗死區(qū)由纖維母細胞、纖維細胞及致密的膠原纖維束組成，呈束狀或平行排列，膠原纖維束之間有極少殘存的心肌組織，炎性細胞浸潤明顯減少，地圖狀瘢痕組織形成；心室腔擴大，室壁變薄。培哚普利組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區(qū)有島狀或細帶狀的心肌組織。通心絡組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區(qū)有島狀或細帶狀的心肌組織，但較培哚普利組病變范圍大。益氣活血組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區(qū)有島狀或細帶狀的心肌組織，但較培哚普利組病變范圍大。見圖2。

假手術組 模型組

益氣活血組 培哚普利組 通心絡組

圖1 第7日HE染色大鼠心肌病理形態(tài)（×50）

假手術組 模型組

益氣活血組 培哚普利組 通心絡組

圖2 第28日HE染色大鼠心肌病理形態(tài)（×100）

4.3 益氣活血中藥對心肌梗死大鼠血清內(nèi)皮素-1、一氧化氮水平的影響

與假手術組比較，模型組大鼠血清ET-1含量明顯升高，NO水平下降（P

表1 各組大鼠血清ET-1、NO水平比較（―x±s，pg/mL）

組別 術后第7日 術后第28日

只數(shù) ET1 NO 只數(shù) ET1 NO

假手術組 10 5.37±1.06 31.12±2.57 9 6.38±1.73 30.38±4.00

模型組 7 13.67±1.68## 19.41±3.24## 7 14.60±2.38## 16.23±3.05##

益氣活血組 9 8.06±1.21** 41.71±4.43** 8 8.97±1.07** 40.11±5.51**

培哚普利組 8 10.65±1.12** 33.02±2.68** 8 7.30±1.37** 45.26±6.60**

通心絡組 8 9.87±0.73** 37.76±3.34** 7 9.57±1.57** 35.06±5.20**

注：與假手術組比較，##P

4.4 益氣活血中藥對心肌梗死大鼠毛細血管密度的影響

在病理圖像分析系統(tǒng)下測定各組大鼠心肌梗死邊緣區(qū)平均毛細血管密度（MCD）。第7日：模型組較假手術組心肌梗死邊緣區(qū)MCD明顯降低（P

表2 各組大鼠心肌MCD比較（―x±s）

組別 n 第7日 第28日

假手術組 20 612.79±33.35 611.11±25.67

模型組 20 533.67±20.27## 493.27±19.38##

益氣活血組 20 1178.50±33.27** 1051.30±30.12**

培哚普利組 20 1010.10±33.27** 1099.30±33.98**

通心絡組 20 1094.30±33.12** 974.75±35.41**

4.5 益氣活血中藥對心肌梗死大鼠毛細血管周細胞計數(shù)影響

第7日：模型組較假手術組心肌梗死邊緣區(qū)周細胞計數(shù)明顯增加，益氣活血中藥組、培哚普利組、通心絡組與模型組比較，梗死邊緣區(qū)的周細胞計數(shù)減少（P

表3 各組大鼠心肌周細胞計數(shù)比較（―x±s，個）

組別 n 第7日 第28日

假手術組 20 0.8±0.84 1.2±0.84

模型組 20 8.2±1.30## 14.0±1.58##

益氣活血組 20 4.2±0.84* 4.4±1.14**

培哚普利組 20 5.8±0.84** 3.6±1.14**

通心絡組 20 4.4±0.55** 5.8±1.30**

注：與益氣活血組比較，P

P

5 討論

臨床研究表明，急性心肌梗死患者多存在“氣虛血瘀”的中醫(yī)病理[8]。實驗的中藥組方中，生曬參、黃芪大補元氣、廣益五臟，針對氣虛的主要病機；三七、川芎、當歸為臣，活血通絡、止血消瘀。諸藥相合，氣行則血行，血行則氣實，諸藥合用，標本兼治，相得益彰，共奏益氣活血、化瘀通絡之功效。

冠脈微血管結構完整性與功能正常，是確保心肌收縮力儲備和局部功能恢復的先決條件，是心肌存活的必備條件，當發(fā)生微小動脈和阻力血管的功能及結構變化時，冠脈血流速率和血流儲備的變化可引起心肌缺血。低灌注梗死區(qū)和正常心肌之間的慢復流區(qū)域毛細血管內(nèi)皮腫脹、突出甚至脫落，受周邊的壞死組織壓迫，毛細血管內(nèi)皮細胞功能和結構完整性受損，心肌毛細血管周細胞功能失調(diào)。血管壁在結構上由血管內(nèi)皮細胞和血管周圍細胞組成，它們分別構成血管的內(nèi)外壁。周細胞又叫壁細胞，可以分化為巨噬細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、平滑肌細胞等，具有收縮能力，從而調(diào)節(jié)微循環(huán)的灌流量和通透性[9-10]。

有研究顯示，早期心肌缺血缺氧性壞死中周細胞數(shù)量在4 h后明顯增多，12 h后開始下降，48 h后顯著低于正常水平，推測周細胞作為心肌中的間質(zhì)細胞可能是心肌纖維化發(fā)生發(fā)展中的主要效應細胞[11]。本實驗結果表明，使用益氣活血中藥后，毛細血管周細胞的計數(shù)減少，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義（P

本實驗結果顯示，益氣活血組較模型組心肌梗死邊緣區(qū)域MCD明顯增加，可見周細胞對毛細血管生長起到調(diào)控的作用。研究發(fā)現(xiàn)新生血管的生長和維持主要由周細胞的募集和分化所推動[12-13]。周細胞募集并伴隨發(fā)生基底膜重塑[14-15]。可見，周細胞的募集對血管新生是必不可少的。

此外，益氣活血中藥可提升內(nèi)皮分泌NO水平，并相應降低ET-1水平。NO和ET-1是由血管內(nèi)皮細胞分泌的一對作用相反的血管活性分子，NO的含量與生物活性的變化能夠反映內(nèi)皮功能的狀態(tài)。與益氣活血組模型組比較，ET-1下降，NO升高，說明益氣活血中藥具有保護血管內(nèi)皮功能的作用。

總之，益氣活血中藥可以通過降低心肌梗死大鼠毛細血管周細胞計數(shù)，維持血管的相對完整性，改善局部微循環(huán)的血流，減少梗死面積，并促進血管新生，調(diào)節(jié)NO/ET-1的平衡，從而達到改善局部心肌血供的目的。

參考文獻：

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篇5

隨著生活節(jié)奏加快，社會競爭日益激烈，越來越多的人們感受到社會生活更為緊張，由此引發(fā)的情緒與心理問題日益增多。憤怒是負性情緒的核心[1]，與健康和疾病的關系極為密切，有國外學者指出[2]，具有憤怒傾向的人群更易出現(xiàn)健康問題。中醫(yī)認為，肝主疏泄，在志為怒，怒傷肝，長期或劇烈的憤怒情緒會阻礙肝疏泄氣機的功能，使氣機逆亂。頭為諸陽之會，五臟精華之血，六腑清陽之氣皆匯聚于腦，方有神明之用，若氣機逆亂，氣血不能正常輸布于腦，腦失濡養(yǎng)日久則可能導致腦老化加速。那么，憤怒情志對腦老化進程究竟有何影響？其機制如何？本研究借助動物實驗探討慢性憤怒應激對大鼠腦老化進程的影響及其部分神經(jīng)內(nèi)分泌機制。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 Wistar雄性大鼠56只，SPF級3月齡，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司（SCXK（京）2006-0009），體重為360±10g。在河南省食品藥品檢驗所動物實驗中心屏障環(huán)境設施動物實驗室（SYXK（豫）2005-0011）進行實驗，并由該實驗室提供標準實驗動物滅菌飼料。正常飼養(yǎng)3日后，按體重隨機分為空白對照組、D-gal衰老及腦老化模型組（簡稱模型組）、慢性憤怒應激組（簡稱憤怒應激組）三組，每組14只，其余14只作為攻擊鼠。各組分籠飼養(yǎng)，自由飲食飲水。（注：模型組予以注射D-gal，憤怒應激組在注射D-gal基礎上引入憤怒刺激。）

1.2 主要試劑及儀器 大鼠血漿E酶免試劑盒（美國R&D公司，批號：09-05）；大鼠血漿NE酶免試劑盒（美國R&D公司，批號：09-05）；大鼠血漿DA酶免試劑盒（美國R&D公司，批號：09-05）；680自動酶標分析儀（美國伯樂）；1575自動酶標洗板機（美國伯樂）；HPS-250生化培養(yǎng)箱（哈爾濱市東聯(lián)電子技術開發(fā)有限公司）；Morris水迷宮（成都泰盟科技有限公司）。

1.3 D-gal衰老模型 參考李文彬等[3] D-gal衰老及腦老化造模方法，模型組和憤怒應激組注射D-gal溶液，制作衰老及腦老化模型。具體方法：將D-gal溶于生理鹽水，濃度為2%，注射容量為0.01ml？g-1，每日1次，頸后部皮下注射，空白對照組注射同體積生理鹽水，連續(xù)6周。每周測體重1次，依所測體重計算注射容量。

1.4 憤怒應激組引入憤怒刺激的方法 課題組在夾尾間接激怒法[3]基礎上，受傳統(tǒng)直接電擊法的啟發(fā)，創(chuàng)立一種新型誘發(fā)大鼠憤怒情緒的方法――間接電擊激怒法。自實驗第三周始每天下午3點對憤怒應激組大鼠進行憤怒刺激。具體方法：使用特制電刺激儀作為電刺激工具，把憤怒應激組大鼠單獨放入特制金屬籠內(nèi)，再隨機放進一只攻擊鼠，用一端電極觸碰攻擊鼠前部（電極的另一端與金屬籠相連以構成回路），攻擊鼠受電擊被激惹，對憤怒應激組大鼠發(fā)起攻擊，雙方互相撕咬、對峙，產(chǎn)生憤怒心理和行為。頻率為1～2次/min，每天刺激15min，連續(xù)4周。最后攻擊鼠丟棄不用。

1.5 標本采集及制備 實驗至第37天始，進行Morris水迷宮測試，為期6天。至第42天完成實驗后，禁食24小時，按每100g體重注射0.5～1.5ml 20%烏拉坦，麻醉后經(jīng)腹主動脈取血4～5ml，靜置、離心，吸取上清液，-70℃保存，用于測定血漿腎上腺素（epinephrine， E）、去甲腎上腺素（norepinephrine， NE）、多巴胺（dopamine， DA）。

1.6 統(tǒng)計學方法 實驗結果用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進行處理。數(shù)值變量以 進行統(tǒng)計描述。數(shù)值變量組間均數(shù)差異的比較，正態(tài)分布和方差符合齊性

檢驗后，采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較用LSD法，P

2 結果

2.1 慢性憤怒應激對D-gal大鼠空間學習記憶能力的影響表1顯示的是Morris水迷宮第6天的測試結果：憤怒應激組較模型組大鼠尋臺時間（searching platform latency， SPL）明顯延長（P

2.2 慢性憤怒應激對D-gal大鼠血漿兒茶酚胺的影響 與模型組相比，憤怒應激組大鼠血漿E、NE、DA含量均明顯升高（P

3 討論

學習記憶能力減退是衰老尤其是腦老化的重要表現(xiàn)，臨床上腦老化患者可呈現(xiàn)進行性精神狀態(tài)衰變，包括遠近期記憶力障礙、情緒改變、分析判斷能力衰退、行為失常等。本研究用Morris水迷宮檢測動物空間定位與學習記憶能力，結果顯示：憤怒應激組較模型組SPL明顯延長，提示持續(xù)的憤怒應激加重D-gal衰老大鼠空間學習能力減退的程度，加速大鼠腦老化進程。

E是由腎上腺髓質(zhì)分泌的一種兒茶酚胺激素，在應激狀態(tài)、內(nèi)臟神經(jīng)刺激和低血糖等情況下，釋放入血液循環(huán)，促進糖原分解并升高血糖，促進脂肪分解，引起心跳加快。當人體經(jīng)歷某些刺激（如興奮，恐懼，緊張等）時，分泌E，促使呼吸加快以提供大量氧氣，同時引起心跳與血液流動加速，瞳孔放大，為身體活動提供更多能量，使反應更加快速。

NE屬于神經(jīng)遞質(zhì)，也是一種激素，循環(huán)血液中的NE主要來自腎上腺髓質(zhì)。目前認為中樞的NE神經(jīng)元與交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)是兩個獨立的系統(tǒng)，但在情緒活動加劇時，兩者的活動都增強。NE系統(tǒng)適度興奮可能產(chǎn)生興奮和欣快的情緒，過度興奮則可能導致躁狂和攻擊行為，說明NE水平變化與情緒變化密切相關。血中E、NE水平，目前被公認為反映交感-腎上腺髓質(zhì)功能狀態(tài)的可靠指標。本實驗結果顯示：接受憤怒刺激的憤怒應激組大鼠血漿E、NE含量明顯上升，可能是由于憤怒激活了交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)，導致大量的E、NE釋放入血。

DA由腦內(nèi)分泌，屬于兒茶酚胺類，參與調(diào)節(jié)機體的覺醒、注意力和精神情緒狀態(tài)。中樞內(nèi)多巴胺系統(tǒng)主要參與對軀體運動、精神情緒活動、垂體內(nèi)分泌功能以及心血管活動等的調(diào)節(jié)。在應激情況下，DA神經(jīng)元生理活動加強，當應激的強度或持續(xù)時間超過機體耐受能力時，將導致認知功能及操作能力下降。酪氨酸的充足供應能增強DA的合成和釋放，在一定程度上拮抗應激對中樞DA神經(jīng)元的損害[4]。本研究中，模型組DA較空白對照組含量有下降趨勢，提示衰老有阻礙DA合成，降低認知能力的傾向；憤怒應激組DA含量較模型組明顯升高，提示憤怒情緒可引起血中DA含量增加。

三種兒茶酚胺E、NE、DA均可興奮HPA軸功能，導致HPA軸亢進，進而引起血中促腎上腺皮質(zhì)激素（adrenocorticotrophic hormone， ACTH）、糖皮質(zhì)激素（cortisol， CORT）濃度上升。海馬上糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoid receptor， GR）表達最高，血中高濃度的CORT極易與GR結合，引起GR損傷，進而導致海馬組織受損[5-6]。海馬是學習記憶的關鍵部位，海馬損傷必將使大鼠學習記憶能力下降，加速腦老化進程。本研究中，長期憤怒應激使大鼠血漿E、NE、DA含量上升，且SPL明顯延長，表明血漿兒茶酚胺水平升高，大鼠學習記憶能力下降，提示出現(xiàn)腦老化跡象。因此可以認為，憤怒情緒長期積累引起血漿兒茶酚胺含量升高，從而進一步激活HPA軸，亢進的HPA軸分泌大量CORT，損傷海馬組織而加速腦老化進程。

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篇6

Depressive effect on proliferation of vascular smooth muscle cells by tetrandrine in hypertensive rats

LI Qing-Ping（Department of Cardiovascular Pharmacology， Nanjing Medical University， Nanjing 210029， China）

LU Ze-An（Department of Cardiovascular Pharmacology， Nanjing Medical University， Nanjing 210029， China）

篇7

中圖分類號：G64文獻標識碼：A文章編號：1003-949X(2008)-12-0077-02

“求美”是大學教育的重要功能。文化、藝術的教育是培養(yǎng)高品位、高素質(zhì)人才的必要內(nèi)容。只有學會欣賞美，才能創(chuàng)造美。先生在北大初建時期就十分重視在大學教育中提倡“求美”，他主張“美育與智育相輔而成，知識以外兼美感情，以圖德育之完成?！被顒咏逃鳛閷W生自由發(fā)展的載體、經(jīng)驗積累的途徑能夠提升學校文化、豐富學校生活、增強學?；盍?，為學生的自由全面發(fā)展提供平臺。

一、“求美”文化藝術活動教育的概念

“求美”文化藝術活動教育是指通過體驗、養(yǎng)成、熏陶，使人文藝術知識內(nèi)化為大學生的人文精神和藝術素養(yǎng)的教育過程。“求美”文化藝術活動教育旨在培養(yǎng)學生人文精神、審美能力和“求美”品格?！扒竺馈蔽幕囆g活動教育堅持為人民服務、為社會主義服務，堅持百家爭鳴、百花齊放，堅持面向現(xiàn)代化、面向世界、面向未來的原則，對文化藝術活動教育內(nèi)容進行了有針對性、有選擇的取舍，努力做到雅俗共賞、健康向上。

“求美”文化藝術活動是大學校園文化的核心內(nèi)容。大學校園文化歷來被看作社會文化發(fā)展的潮頭和先導，它相對于一般社會文化具有先進性和超前性，對社會文化發(fā)展負有選擇與創(chuàng)造的責任。如今，隨著校園對外開放的程度日益擴大，社會上的各種文化觀念、行為準則、生產(chǎn)方式也開始躋身校園。多元娛樂活動和生活方式的出現(xiàn)，對學術、理性、審美等具有品味的校園文化沖擊極大。高校面臨著用高雅健康的文化藝術活動占領校園文化陣地，用積極向上的內(nèi)容和形式陶冶大學生思想情操的考驗。

二、“求美”文化藝術活動教育的意義

1.文化藝術活動教育有利于大學生知識結構的完善

新時期，社會需要高等學校教育培養(yǎng)出集科學素養(yǎng)、人文素養(yǎng)、藝術素養(yǎng)于一身的高素質(zhì)人才。過去，高校普遍重視為大學生提供專業(yè)教育，對其他的領域有所淡化或忽視，致使大學生在知識結構的構成上，更多的是專業(yè)性和專門化的知識體系，其思考和認識的視野比較狹窄。專業(yè)知識的教育只形成了大學生知識結構的一個部分，要形成完善的知識結構就必須有相對的輔助知識作為支撐?！扒竺馈蔽幕囆g活動教育能有效的促進科學與人文的交融，通過科學與人文“兩種文化”間的深刻對話，使他們在獲得知識的基礎上，形成深厚的文化底蘊，達到溝通、整合的目的，使大學生的理性與情感，科學精神與人文素養(yǎng)得到和諧發(fā)展，從而完善大學生的知識結構。

2.文化藝術活動有利于大學生社會性的培養(yǎng)

人的社會性是人在社會中生存和發(fā)展的基礎和前提。人的社會性是指人在社會化的過程中具有了人類所特有的合作、理解、同情、關愛等主體意識，人具有了個體完整性。如果人缺乏了社會性，不僅僅是難以融入社會，而且容易產(chǎn)生遠離社會的意識，一旦個體產(chǎn)生遠離社會的意識，的偏激和偏見就可能滋生，不僅不利于社會的健康發(fā)展，而且也會影響人的健康發(fā)展?！扒竺馈蔽幕囆g活動，倡導提升大學生的人文素養(yǎng)、培養(yǎng)大學生的公民意識、形成大學生的社會責任感，通過人文、社會、科學知識、能力和修養(yǎng)的教育，培養(yǎng)大學生的合作精神、團隊意識、集體主義、人文關懷等主體意識，使大學生認識到人的社會性對于人、社會、世界發(fā)展的意義和價值，使大學生在人與人、人與社會的沖突與融合中，學會克服缺陷，充分理解他人和社會，減少片面的看法，提升大學生的社會性。

3.文化藝術活動教育有利于大學生倫理道德的形成

“求美”文化藝術活動教育是著重于精神領域的教育，它以文化藝術的形式，富有形象性、感染性的特點，使人們在潛移默化的影響下，激起情感共鳴，從而使社會道德要求和善惡觀念逐漸形成。文化藝術活動能展現(xiàn)美好的生活圖景，深刻地反映社會生活，給人們提供區(qū)別善惡、美丑的標準，引起內(nèi)心共鳴，使人們受到深刻的思想教育。長期以來，由于高等教育過分注重專業(yè)教育，使得大學生在思考人、社會、自然之間的關系方面，缺乏倫理道德觀念。當今，世界性的生態(tài)保護與地球的永恒發(fā)展問題、國際化與本土文化的問題、生物科技與社會倫理問題、國際政治與民族沖突、種族沖突與宗教倫理等等，都成為當今世界人們必須思考的問題。因此，通過文化藝術活動，可以培養(yǎng)大學生的人文精神，提升大學生的文化品格，使他們尊重人的價值，獲得超越人的生存的精神內(nèi)涵，以其自主性、社會性思考人與社會、自然之間的關系處理，并以倫理學的視角思考科技發(fā)展與人、社會、自然之間的生態(tài)倫理關系，有利于培育形成大學生的倫理道德觀念。

4.文化藝術活動教育有利于大學生審美情趣的培育

對美的不同觀點，不僅是個體對美的評判標準，也集中體現(xiàn)出個體對美的感受、認知、理解和欣賞的素養(yǎng)，展示出個體在生活中的審美情趣。因此，對大學生的審美情趣的培育，不僅關系著大學生以何種標準去評判、感受、認知、理解和欣賞美，而且關系著大學生以怎樣的審美情趣在生活中創(chuàng)造美。學會以高尚的審美情趣感受美、理解美、欣賞美、創(chuàng)造美，既是完善人生發(fā)展的一個重要方面，又是營造和創(chuàng)建現(xiàn)實生活及追求未來生活的內(nèi)在機制和動力。大學生已進入青年階段，不僅關注自己和他人的儀表美、語言美、行為美，而且以更為細膩的情感和獨立的思考來感受、認知、評鑒生活中各種人和事物的更廣泛、更深刻的美，并以美的標準創(chuàng)造美。所以，通過文化藝術活動教育，可以提高大學生的審美情趣，讓大學生對美好事物的感受、理解和創(chuàng)造從簡單的、表面的印象提升為對豐富、深刻的美好意境的欣賞，升華到精神美的境界，激發(fā)大學生理解美、欣賞美和創(chuàng)造美的意識和激情。

三、“求美”文化藝術活動教育內(nèi)容確定的原則

“求美”文化藝術活動教育的內(nèi)容體系是大學生文化藝術素質(zhì)教育的基礎環(huán)節(jié)，是實現(xiàn)教育目標的重要保證，是大學生“求美”文化藝術活動教育有效實施的根本條件。其教育內(nèi)容的確定既要符合素質(zhì)教育的目的又要滿足學生的需求，既要區(qū)別專業(yè)教育、學科教育又要與專業(yè)教育、學科教育相銜接，因此要科學、合理的進行選擇、整合、優(yōu)化，這就必須遵循一定的客觀原則。

1.導向性原則

隨著經(jīng)濟的發(fā)展、分工的細化、文明的進步，現(xiàn)代社會將越來越重視人才的綜合品性，特別是人才的團結合作意識、人文素養(yǎng)、心智模式。因此，構建“求美”文化藝術活動教育內(nèi)容體系，應該關注大學生品德、團隊意識、創(chuàng)新精神、人文修養(yǎng)等特性的培育。讓大學生獲得一個合格建設者所應該具備的公民意識、社會責任意識，讓社會逐步理解大學生這些素質(zhì)的提升對于社會發(fā)展的意義和價值。

2.基礎性原則

大學生“求美”文化藝術活動教育不是專業(yè)教育的附屬，它主要是為大學生的全面發(fā)展提供通識性、廣博性的基礎性知識和能力。大學生“求美”文化藝術活動教育不是對學生進行專業(yè)知識和專業(yè)能力的教育，而是主要進行基本認識、基本素養(yǎng)、基本技能的訓練，是從大學生全面發(fā)展的角度構建內(nèi)容體系。通常我們將人的進一步發(fā)展的基礎歸納為三個方面，即知識、能力、修養(yǎng)。所謂“知識”，不僅是指專業(yè)知識，還包括人文歷史、文明道德、科學技術、社會藝術等一般性的知識；所謂“能力”，也不僅僅是指專業(yè)的技能技巧，還包括思維理解能力、實踐操作能力、自主學習能力等等；而“修養(yǎng)”更是一個人發(fā)展的基石，表現(xiàn)為健康的個性心理品質(zhì)、積極的團隊合作意識、文明的社會道德行為、良好的科學素養(yǎng)等。

3.民族性原則

在大學生“求美”文化藝術活動教育內(nèi)容選擇的過程中，不僅要重視學生基礎性知識和能力的培養(yǎng)，還應特別重視中國傳統(tǒng)文化的特色，要求大學生熟悉中國文化的精髓，知曉中國文化的歷史淵源。這一原則的提出主要是針對我國高校大學生缺乏對我國傳統(tǒng)文化全面的認識和理解，特別是我國傳統(tǒng)文化中的人文教育思想，儒家的“仁”、“孝”、“信”的理念，對待人生和社會的積極態(tài)度等思想學說，這些內(nèi)容對當代大學生可能比較陌生。所以，堅持民族性原則，合理安排教育內(nèi)容，加強對我國民族文化及思想方面的教育，不僅有利于大學生認識和理解我國民族文化的博大精深，而且能夠培養(yǎng)大學生的民族精神。

4.計劃性原則

大學生“求美”文化藝術活動教育內(nèi)容體系構建如果不合理，就容易造成與專業(yè)教育和學科課程內(nèi)容的交叉，從而沖擊專業(yè)教育。要實現(xiàn)把大學生“求美”文化藝術活動教育內(nèi)容融入學校整體教育內(nèi)容體系，既達成素質(zhì)教育的目標，又不至于沖擊專業(yè)教育。因此，必須有目的、有計劃地對內(nèi)容體系進行精心、合理的設計，避免教育內(nèi)容的重疊，使大學生“求美”文化藝術活動教育內(nèi)容體系盡量系統(tǒng)化、簡潔化。

5.整合性原則

大學生“求美”文化藝術活動教育的內(nèi)容不是相對獨立的體系和結構，而是眾多相關學科基礎文化知識、技術能力經(jīng)驗的綜合，各個方面密切相關、相互作用、相互制約，共同構成一個開放的適合學生各方面需要的內(nèi)容整體。在內(nèi)容選擇上不是“雜、亂、散”碎片內(nèi)容的堆砌，而應遵循教育規(guī)律，遵循大學生發(fā)展的需求，圍繞人的綜合素質(zhì)的提高，整合大學生的校園生活和社會生活，并將知識性學習和體驗養(yǎng)成性的教育有機的結合起來，做到由淺入深、重點突出、整體協(xié)調(diào)，從而提升學生的主體意識，學會處理人與人、人與社會之間的關系，充分理解他人和社會，培育大學生的社會責任感，倡導集體主義、人文關懷等時代精神。

6.體驗與養(yǎng)成性原則

大學生“求美”文化藝術活動教育不同于其他教育，不能單靠知識傳授和技能培養(yǎng)來完成，而是要通過教育、體驗、養(yǎng)成、熏陶，從而促使大學生把學到的知識和能力內(nèi)化為自身的素質(zhì)和修養(yǎng)，塑造他們的科學與人文精神。這就需要在內(nèi)容的構建上強化體驗性和養(yǎng)成性教育，把體驗性、養(yǎng)成性的活動和方法作為教育內(nèi)容，通過規(guī)范的引導、環(huán)境的熏陶、身體力行的實踐，幫助大學生形成文明的舉止和良好的人格。

四、“求美”文化藝術活動教育的內(nèi)容

1.哲學知識普及活動

根據(jù)的觀點，“任何真正的哲學都是自己時代精神的精華”。對青年大學生進行哲學教育，增強其理論思辨能力，有助于他們高屋建瓴，把握整體，突破各具體學科的局限，超越人文與科學認識的界限。把哲學教育作為“求美”文化藝術活動教育的主要內(nèi)容，有助于引導學生通過哲學思辨，去探究超越于現(xiàn)實功利的人生意義、理想、信仰與終極關懷，構建正確的世界觀、人生觀和價值體系。開設定期的論壇、講座是進行哲學知識普及的最好形式。

2.傳統(tǒng)文化教育活動

我國的傳統(tǒng)文化是在中國社會長期發(fā)展過程中逐漸形成并支配著大多數(shù)人的具有積極意義的價值觀念、道德標準和行為規(guī)范等意識形態(tài)因素，是一個蘊含著豐富內(nèi)容的綜合體。所以，加強對我國文化及思想方面的知識教育，不僅有利于大學生認識和理解我國傳統(tǒng)文化的博大精深，而且能讓學生重塑民族人文精神，樹立奮進圖強的民族精神，激發(fā)學生的愛國主義情感與高度的民族責任感。如開展詩詞吟誦大賽、誦讀經(jīng)典活動、傳統(tǒng)紀念日的紀念活動、典型歷史人物的學習活動等。

3.世界文化教育活動

隨著我國改革開放的不斷深入，西方多元文化的價值觀、不同主張的自由化思想觀念等對我國高校大學生的沖擊很大，極大地影響著大學生對我國傳統(tǒng)文化和社會發(fā)展的立場和態(tài)度。通過對世界文化的教育，使大學生對世界文化及思想有個系統(tǒng)、全面的認識，可以讓學生了解和認識世界各國人民的歷史，掌握歷史發(fā)展的脈搏，讓學生在錯綜復雜的國際關系中保持清醒的頭腦?？梢蚤_設國際文化交流論壇，邀請專家進行國際文化講座，進行國際文化交流，開展西方經(jīng)典電影、戲劇、文學賞析活動等。

4.人與自然、社會和諧共處教育活動

隨著科學技術的發(fā)展，人與自然之間的關系出現(xiàn)了改變，人類的活動影響了自然的自我發(fā)展,并嚴重危及了人類自身的生存和發(fā)展。因此，應該讓大學生了解人與自然和諧共處的意義和價值，思考人類社會可持續(xù)發(fā)展的問題，加強大學生的環(huán)境意識。另外，讓大學生確立起“人”是社會經(jīng)濟發(fā)展的最終目的這一思想觀念，使大學生學會與人相處、與人交流，從而實現(xiàn)人與社會的和諧發(fā)展。可以通過開展“保護母親河”主題活動、第三只眼看社會主題攝影展、“人與自然”主題征文等活動進行這一內(nèi)容的教育。

5.文藝鑒賞教育活動

文學、藝術作品包含著人們對不同時期人的生存狀況的描寫和反映，同時也體現(xiàn)著人們對人生問題的深刻思考，不僅能引發(fā)大學生的思考，而且能夠升華大學生的人文關懷、潤澤大學生的心靈、促進大學生人的本性的覺醒和提升。通過引導大學生進行文藝作品鑒賞，能夠讓他們領悟美的真諦，培養(yǎng)大學生欣賞美、體驗美、鑒賞美和創(chuàng)造美的意識，進一步提高大學生的藝術修養(yǎng)和審美能力，使他們對文學、藝術作品有一定的的鑒賞和評論能力，能借助文學、美術、音樂來表達自己的感情，能將追求完美的意識滲透到生活和學習中去，升華大學生對生活美、藝術美的追求，培養(yǎng)其高雅的審美情趣。可以通過戲劇、歌舞、器樂、文學、傳統(tǒng)藝術表演等各種形式培養(yǎng)大學生的審美能力。

參考文獻：

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篇8

研究表明CXC趨化因子配體16(CXC chemokine ligand 16，CXCL16)作為一種新的趨化因子配體，能夠促進動脈平滑肌的增殖〔1〕。羅格列酮(RSG)作為過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)的激動劑抑制血管平滑肌細胞的增殖〔2〕。本研究通過觀察RSG對CXCL16誘導的血管平滑肌細胞增殖的影響，驗證其在血管平滑肌增殖中的作用，并進一步探討其機制。

1 材料與方法

1.1 材料 成年大鼠，雌雄不限(由吉林大學實驗動物中心提供)。RPMI1640培養(yǎng)基(美國Gibco公司)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，重組鼠CXCL16(美國R&D systems公司)，LY294002(美國BioVision公司)，吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)(美國Sigma公司)，兔抗大鼠α平滑肌肌動蛋白(αSMA)多克隆抗體(武漢博士德生物工程公司)，兔抗大鼠CXCL16多克隆抗體(美國Santa Cruz公司)，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒(北京中山生物技術有限公司)。RTPCR試劑盒(立陶宛MBI Fermentas公司)。引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 大鼠髂主動脈平滑肌細胞的分離與培養(yǎng) 經(jīng)水合氯醛麻醉后，頸動脈放血處死動物。在無菌操作條件下迅速取出全部髂段主動脈，立即置于冷DHank′s液中，用眼科鑷仔細剝離近外膜側(cè)1/3處含成纖維細胞多的外膜后，放在無菌的玻璃紙上固定后，縱形剖開血管，用鋒利刀片輕輕刮除多余脂肪及內(nèi)膜，DHank′s液洗滌，放入培養(yǎng)皿中，用眼科剪剪成1 mm×1 mm×1 mm大小，將小組織塊均勻鋪于培養(yǎng)瓶壁，置于CO2孵箱。待組織塊貼壁牢固后，再加入含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

1.2.2 平滑肌細胞的傳代及鑒定 待細胞生長至瓶底的80%以上后，吸棄培養(yǎng)液，無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)充分清洗3次。加入0.25%胰蛋白酶少許，室溫下將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下觀察。待細胞回縮、細胞間隙增大后，立即用含10%胎牛血清的培養(yǎng)液終止消化，吸除消化液，加PBS液，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶，除去殘余消化液。加入培養(yǎng)液，用吸管輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之脫落瓶壁形成細胞懸液，分裝后繼續(xù)培養(yǎng)。取其4～6代細胞用兔抗大鼠αSMA多克隆抗體對其進行鑒定。

1.2.3 用細胞計數(shù)法檢測CXCL16對平滑肌細胞增殖的影響 以1×104/ml個細胞接種于24孔培養(yǎng)板，用濃度為50 ng/ml的CXCL16分別作用于平滑肌細胞1、2、4及8 d，用細胞計數(shù)法測定平滑肌細胞的增殖情況。僅含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液作為陰性對照;含20 ng/ml血小板生長因子(PDGF)BB的上述培養(yǎng)液作為陽性對照。

1.2.4 藥物處理 取1.2.2傳代細胞，分為5組，用不同藥物進行處理。空白對照組(1組)：RPMI 1640培養(yǎng)液(含10%胎牛血清)培養(yǎng)細胞。CXCL16組：在1組培養(yǎng)液基礎上加入終濃度為50 ng/ml CXCL16。PI3K/Akt特異性抑制劑組(CXCL16+LY294002)：在1組培養(yǎng)液基礎上加入終濃度為20 μmol/L LY294002，作用1 h后，再加入終濃度為50 ng/ml CXCL16。核轉(zhuǎn)錄因子(NFκB)特異性抑制劑組(CXCL16+PDTC)：在1組培養(yǎng)液基礎上加入終濃度為100 μmol/L PDTC，作用1 h后，再加入終濃度為50 ng/ml CXCL16。RSG組(CXCL16+RSG)：在1組培養(yǎng)液基礎上加入終濃度為20 μmol/L RSG，作用1 h后，再加入終濃度為50 ng/ml CXCL16。每組至少重復3次。

1.2.5 噻唑藍(MTT)法檢測血管平滑肌細胞的增殖 將細胞消化后，制備單細胞懸液。以1×104個/孔接種至96孔板，培養(yǎng)24 h后棄去上清，加入條件培養(yǎng)基150 μl，每組設8個復孔。培養(yǎng)4 d后，吸棄培養(yǎng)液，每孔加入20 μl MTT，37℃繼續(xù)孵育4 h。吸棄培養(yǎng)液，每孔加入150 μl DMSO終止反應。振蕩混勻，置酶標儀上測定490 nm處的吸光度(A490)。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS11.5軟件，所有數(shù)據(jù)以x±s表示。組間比較采用方差分析或秩和檢驗。

2 結 果

2.1 血管平滑肌細胞的鑒定 倒置顯微鏡下觀察，細胞呈長梭形生長，在細胞生長融合部分可見明顯的“峰谷”形態(tài)。用平滑肌細胞特異性抗體αSMA進行免疫細胞化學鑒定，光鏡下觀察可見細胞胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒，證明培養(yǎng)的細胞為血管平滑肌細胞。見圖1。

圖1 大鼠平滑肌細胞免疫組化鑒定(DAB，×400)

2.2 CXCL16對平滑肌細胞增殖的影響 自CXCL16作用的第1天起，CXCL16組平滑肌細胞增殖能力明顯高于陰性對照組(P

2.3 RSG抑制平滑肌細胞的增殖 以50 ng/ml CXCL16作用于平滑肌細胞4 d后，采用MTT法測定細胞的增殖能力。結果顯示，CXCL16組平滑肌細胞增殖能力較對照組明顯提高(P

3 討 論

人們發(fā)現(xiàn)動脈粥樣硬化(AS)不只是簡單的脂質(zhì)堆積，炎癥在其發(fā)生、發(fā)展以及最終斑塊破裂的整個病理過程中顯示出至關重要的作用〔3〕。因此，許多細胞因子引起了人們的關注，CXCL16是一種新發(fā)現(xiàn)的趨化因子配體。已發(fā)現(xiàn)CXCL16可促進平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞增殖，還能增加細胞與細胞的黏附，也有研究發(fā)現(xiàn)AS斑塊處巨噬細胞和平滑肌細胞CXCL16表達增高，因此可推斷CXCL16在多個環(huán)節(jié)參與AS的發(fā)生、發(fā)展，同時也提示它可能在損傷修復以及炎癥反應中起著重要的作用。本研究以離體血管平滑肌細胞為原料，發(fā)現(xiàn)CXCL16組平滑肌細胞增殖能力明顯高于陰性對照組，這種促進作用的峰值出現(xiàn)在第4天，此結果驗證了它對血管平滑肌細胞的增殖作用，同時也證實盡管炎癥反應在上調(diào)CXCL16表達中起著重要的作用，但最終這些炎癥反應引起的細胞增殖可能還是由CXCL16及其受體來實現(xiàn)的。這就為糾正CXCL16表達，進而治療AS等損傷修復型疾病提供了一種新的可能。

RSG除了作為胰島素的增效劑在臨床上廣泛應用外，近年也有很多用它治療AS等其他疾病的嘗試〔4～6〕。RSG可提高內(nèi)皮系統(tǒng)對各種損傷的修復能力，也提示了胰島素增敏劑對血管內(nèi)皮細胞很好的保護作用，對維持血管內(nèi)皮系統(tǒng)功能至關重要〔7〕。本研究通過MTT法驗證RSG對CXCL16誘導的血管平滑肌細胞增殖有明顯的抑制作用。RSG等噻唑烷二酮類藥物改善血管內(nèi)皮功能、抗AS的機制尚未徹底清楚可能為：① 通過增加胰島素的敏感性，增加eNOS的表達，促進內(nèi)皮細胞釋放NO，抑制ET1的釋放等間接的因素而改善內(nèi)皮功能〔8〕;②最近發(fā)現(xiàn)PPARγ也存在于AS發(fā)展的關鍵細胞如血管平滑肌細胞、巨噬泡沫細胞和血管內(nèi)皮細胞，提示噻唑烷二酮類藥物可直接作用于PPARγ影響AS的進程〔9〕;③ 抑制炎性介質(zhì)釋放，發(fā)揮抗炎、抗氧化應激作用，減輕AS發(fā)展過程〔10〕。同時，發(fā)揮降糖、降脂作用，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能，從改善代謝方面發(fā)揮保護作用。本實驗為RSG抗血管平滑肌增殖提供依據(jù)，同時也為開發(fā)羅格列酮臨床上新的使用途徑提供了理論基礎，噻唑烷二酮類藥物抗AS的具體機制還需更進一步研究。

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篇9

關鍵詞: 反義寡核苷酸;血管平滑肌細胞;再狹窄;血小板衍化生長因子;受體;細胞核增殖抗原

摘 要:目的 研究血小板衍化生長因子β受體（PDGFR-β）反義寡核苷酸（AODN）對血管平滑肌細胞（VSMC）增殖的影響. 方法 建立大鼠血管平滑肌細胞體外增殖模型.將細胞分為反義寡核苷酸組、正義寡核苷酸組、無義寡核苷酸組和空白對照組，其中反義組按濃度又分為1，2.5，5，10和15μmol L-1 5小組.在加藥后24，48和72h以流式細胞儀測定細胞周期，免疫細胞化學染色分析細胞核增殖抗原的表達，MTT（四唑鹽）比色法測定細胞增殖活力. 結果 10μmol L-1 PDGFR-βAODN干預VSMC48h后，處于DNA合成前期（G0 /G1 ）細胞數(shù)分數(shù)（0.70）高于空白對照組（0.07，P

Keywords:antisense oligonucleotide;vascular smooth muscle cell;restenosis;platelet derived growth factor;receptor;proliferating cell nuclear antigen

Abstract:AIM To study the effect of PDGFR-βAODN on proliferation of cultured rat aortic vascular smooth muscle cells（VSMC）.METHODS Cultured rat aortic VSMC mod-el was established in vitro.The cells were pided into antis-ese oligonucleotide（AODN）group，sense oligonucleotide（SODN）group，scrambled oligonucleotide（CODN）group and control group.The cells in AODN group were subpided into five small groups by concentration of1，2.5，5，10，15μmol L-1 .MTT assay，flow cytometry，immunohis-tochemistry for proliferating cell nuclear antigene（PCNA）were used to determine the effects of PDGFR-βAODN on proliferation of VSMC.RESULTS The percentage of quies-cent cells（G0 /G1 ）of AODN group at48h（0.70）were much higher than that of control group（0.07），P

0 引言

經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術（PTCA）和冠狀動脈旁路移植術（CABG）是治療冠心病的有效手段，但30%～50%術后再狹窄嚴重影響手術療效［1，2］ .研究證明再狹窄的實質(zhì)就是血管中層平滑肌細胞向內(nèi)膜下遷移和增生

［3］ .血小板衍化生長因子及其β受體（PDGFR-β）在血管平滑肌細胞（VSMC）的遷移增生過程中起重要作用

［4］ .我們擬探討在大鼠體外VSMC增殖模型中，PDGFR-β反義寡核苷酸（AODN）對VSMC增殖的影響.

1 材料和方法

1.1 材料 SD大鼠清潔級，4wk齡，雌雄不限，體質(zhì)量（250±20）g，4～8wk齡，由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供;抗大鼠PCNA mAb、混合膠原酶、胰蛋白酶、MTT購于Sigma公司;96孔培養(yǎng)板、6孔培養(yǎng)板購于Costar公司;PDGFR-βAODN鏈（18bp）5’TAT CAC TCC TGG AAG CCC3’，正義寡核苷酸鏈（SODN）5’GGG CTT CCA GGA GTG ATA3’，無關寡核苷酸鏈（CODN）5’GTG ATA GTA TGC CGA GCA3’，由加拿大上海Sagon公司合成并進行全硫代磷酸化修飾和電泳鑒定;SABC試劑盒購于武漢博士德生物工程公司;胎牛血清購于浙江金華犢牛研究所;流式細胞儀（EFICS ELITE法國）;酶聯(lián)免疫檢測儀（DG5031，華東電子儀器廠）;SD大鼠頸椎脫臼法處死后，采用膠原酶法分離取得VSMC進行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，經(jīng)α-SMactin免疫細胞化學染色鑒定確為VSMC、純度>95%，采用5～10代細胞為實驗對象.

1.2 方法

1.2.1 VSMC細胞增殖活力的測定 取生長融合期細胞制成1×104 L-1 密度的單細胞懸液接種于96孔板，待細胞完全貼壁伸展后，無血清DMEM培養(yǎng)液馴化24h.采取不同的加藥方案:①單加不同濃度的反義寡核苷酸;②加入5.0μmol L-1 反義、正義、無義寡核苷酸;③空白組加等量培養(yǎng)液，設調(diào)零孔.每24h各取8孔，每孔內(nèi)加入MTT20μL，37℃繼續(xù)孵育4h后小心吸去培養(yǎng)液.每孔加入二甲基亞砜（DMSO）150μL，震蕩器震蕩10min，用酶聯(lián)免疫檢測儀（波長490nm）測定各孔的吸光度值［5］ .細胞增殖抑制百分率=（1-試驗組A值）/對照組A值均數(shù)×100%.

1.2.2 PCNA免疫細胞化學染色 將5×105 L-1 密度細胞懸液，接種于已置蓋玻片的6孔培養(yǎng)板中，待細胞完全貼壁伸展后，無血清DMEM培養(yǎng)液馴化24h后，加入含不同干預因素（同1.2.1）的200mL L-1 胎牛血清DMEM，每24h各取5孔，取出蓋玻片，按SABC試劑盒說明進行其余步驟操作，最后DAB顯色，常規(guī)系列脫水、透明.鏡下觀察.PCNA染色陽性標準:細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒.隨機計數(shù)5張蓋玻片中5個以上高倍鏡視野500個細胞，計算平均每100個細胞中陽性百分率，根據(jù)染色強度和范圍分為:陰性（-）:陽性細胞50%.

1.2.3 流式細胞儀測定細胞周期 將細胞制成2×105 L-1 密度的單細胞懸液，接種培養(yǎng)瓶，48h后棄去 培養(yǎng)液，無血清馴化24h，細胞周期同步化后，分別加入5.0μmol L-1 反義、無義寡核苷酸，繼續(xù)培養(yǎng)，48h后停止培養(yǎng)，0.01mol L-1 PBS（pH7.4）洗2次，2.5g L-1 胰酶消化后離心，以700mL L-1 的冷乙醇制成1×10

6 L-1 密度單細胞懸液，30min后，PI染色，流式細胞儀檢測.

統(tǒng)計學處理:實驗數(shù)據(jù)用x ±s表示，組間進行t檢驗，P

2 結果

2.1 寡核苷酸對VSMC增殖活力的影響 相同濃度（10μmol L-1 ）各種寡核苷酸對血管平滑肌作用24h后，各加藥組與空白對照組相比MTT A值無明顯差異（P>0.05），各加藥組之間也無明顯差異（P>0.05）;在加藥后48h反義組與空白組之間有顯著性差異（P0.05），5μmol L-1 以上濃度的PDGFR-βAODN對細胞有明顯增殖抑制作用，表明PDGFR-βAODN增殖抑制作用有明顯的濃度依賴效應.

表1 寡核苷酸對血管平滑肌細胞增殖的影響　略

2.2 PDGFRβAODN對細胞周期的影響 與空白對照組相比10μmol L-1 AODN作用于VSMC24h后細胞G1 期（DNA合成前期）比數(shù)分數(shù)達到0.70，而空白對照組G1 期細胞只占0.50明顯低于AODN組（P

2.3 PCNA免疫細胞化學染色 空白對照組PCNA染色呈強陽性（Fig1A）;5μmol L-1 PDGFR-βAODN作用于VSMC48h后細胞PCNA染色呈陽性;10μmol L-1 以上AODN作用于VSMC48h后細胞PCNA染色呈陰性（Fig1B），陽性率與對照組比較有明顯差異（P

圖1 PCNA染色　略

表2 不同寡核苷酸對血管平滑肌細胞PCNA表達的影響　略

表3 反義寡核苷酸濃度對血管平滑肌細胞PCNA表達的影響　略

3 討論

PDGF對VSMC是一種強烈的促增殖劑和趨化劑，并且PDGF對VSMC的作用有一定的組織特異性［6］ .當大量PDGF和β型受體結合后通過絡氨酸激酶啟動細胞的增殖信號，最終導致VSMC大量增生和再狹窄的發(fā)生［7，8］ .PDGF的主要作用是使細胞從非分裂狀態(tài)的G1 期進入分裂周期，起著一種“獲能因子”（competence factor）的作用，其他生長因子如成纖維細胞生長因子（FGF）可以促進細胞從G1 期進入DNA合成期［9］ .反義寡核苷酸可以通過其特異的堿基序列與目的基因相結合阻止目的基因的表達［10］ .因此PDGFR-β反義寡核苷酸可以阻止VSMC的PDGFR-β蛋白的表達從而阻斷其與PDGF的結合，使細胞停留于G1 期，最終抑制VSMC的增殖.另外我們在實驗中發(fā)現(xiàn)PDGFR-βAODN作用于VSMC24h對VSMC無明顯增殖抑制作用，這與AODN雖被細胞攝取，但尚未能與目的基因達到充分結合等原因有關;過去的研究證明PCNA是DNA復制和細胞分裂過程中DNA多聚酶最重要的輔助因子.PCNA位于細胞核內(nèi)，它的表達量與VSMC的增殖活力呈正相關［11］ .因此我們在實驗中以PCNA的表達強度側(cè)面反映VSMC的增殖活力，結果間接證明了PDGFR-βAODN對VSMC增殖抑制作用.另外也有少數(shù)人認為寡核苷酸的作用無需任何序列特異性，而是與各種生長因子或膜蛋白相結合，抑制細胞的遷移、增殖.這與目前大多數(shù)同仁的觀點不符，與本實驗的研究結果也不相符.我們發(fā)現(xiàn)正義寡核苷酸和錯義寡核苷酸對VSMC的增殖均無明顯抑制作用.這說明寡核苷酸對細胞的影響有嚴格的序列特異性.

PDGFR-βAODN作為基因工程和分子生物學的產(chǎn)物對體外培養(yǎng)VSMC的增殖可以產(chǎn)生很大程度的抑制，另外因為該反義寡核苷酸對于VSMC具有一定的組織特異性，所以PDGFR-βAODN有望能在體內(nèi)成功抑制血管損傷后VSMC的異常增生和再狹窄的形成.

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篇10

【關鍵詞】 松果體； 褪黑素；替代治療；學習記憶；室管膜下區(qū)；神經(jīng)干細胞；增殖；大鼠

【Abstract】 Objective To investigate the effects of melatonin replacement therapy on the learning and memory as well as on the proliferation of neural stem cells in the subventricular zone（SVZ） of the lateral ventricle in pinealectomized adult rats.Methods Thirty male Sprague-Dawely rats were randomly pided into three groups with ten rats per group： sham-operated，pinealectomized and melatonin-replacement therapy. After two days of operations，the rats in melatonin-replacement therapy group received daily peritoneal injection of melatonin（ 200μg/kg body weight，dissolved in 5ml of 5% ethanol-NaCl solution）for twenty one consecutive days; while the rats in sham-operated and pinealectomized groups were daily given the equal volume of vehicle under the same conditions. After sixteen days of operations，the rat performences in Morris water maze were detected for five consecutive days. Then the number of proliferating cell nuclear antigen immunoreactive （PCNA-IR） cell nuclei in the SVZ was counted.Results Navigation tests showed that the escape latency for finding the platform during training trials of pinealectomized rats was significantly longer than that of sham-operated or melatonin-replacement rats （P＜0.01）. Probe tests revealed that pinealeetomized rats had much worse knowledge of the platform’s prcise location than sham-operated or melatonin-replacement rats did （P＜0.01）. Similarly，the mumber of PCNA-IR cell nuclei in the SVZ of pinealectomized rats was significantly lower than that in sham-operated or melatonin-replacement rats （P＜0.01）. However，melatonin replacement therapy reversed the above parameters（P＜0.01），which nearly reached the levels of sham-operated rats（P＞0.05）.Conclusion The data for the first time demonstrate that pinealectomy reduces the level of endogenous melatonin，and impairs the learming and memory processes as well as the proliferation of neural stem cells in the SVZ，whereas exogenous melatonin replacement therapy can reverse these changes，indicating that melatonin plays an important role in maitaining the normal learning and memory processes as well as in augmenting the neurogenesis in SVZ; and that melatonin may promote the neurogenesis in SVZ via activation of melatonin receptors in both neural stem cells and astrocytes，thereby enhancing olfactary memory.

哺乳動物側(cè)腦室室管膜下區(qū)（subventricular zone ，SVZ）是腦內(nèi)終生存在神經(jīng)發(fā)生（neurogenesis）的一個主要部位，由此產(chǎn)生的神經(jīng)干細胞通過有絲分裂形成祖細胞（progenitor cell），后者遷移到嗅球，分化成新的中間神經(jīng)元，代替衰老或死亡的神經(jīng)細胞，使局部神經(jīng)環(huán)路的結構得到不斷更新，從而發(fā)揮正常的嗅覺及嗅覺記憶功能［1］。褪黑素是主要由松果體合成和分泌的一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素，已證實其不僅具有促進胚胎個體發(fā)育及體外培養(yǎng)神經(jīng)干細胞增殖的功能［2，3］，而且還可提高學習記憶能力［4］。然而，迄今仍匱乏有關褪黑素對成年在體SVZ神經(jīng)發(fā)生及學習記憶影響的報道。為此，筆者最近進行了研究并初步觀察到，松果體切除對成年大鼠SVZ神經(jīng)發(fā)生及學習記憶均產(chǎn)生類似的負性效應［5］。為進一步揭示褪黑素、神經(jīng)干細胞及學習記憶三者之間的內(nèi)在聯(lián)系，本研究通過觀察褪黑素替代治療對上述指標的影響模式，為闡明學習記憶的神經(jīng)內(nèi)分泌機制提供新的資料。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 小鼠抗人PCNA單克隆抗體為DAKO公司產(chǎn)品；生物素結合IgG、鏈霉菌抗生物素-過氧化酶（SP）及二氨基聯(lián)苯胺（DAB）染色試劑盒均為福州邁新公司產(chǎn)品；褪黑素為Sigma公司產(chǎn)品。

1.2 動物與分組 選用清潔級健康雄性Sprague-Dawely大鼠30只，8～10周齡，體重150～180g，由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。將大鼠隨機分為以下3組，每組10只：假手術、去松果體及褪黑素替代治療組。

1.3 動物模型的建立 參照袁群芳等的方法［4］，進行松果體切除術，假手術除不切除松果體外，其余步驟與上述相同。所有動物在自然光暗周期的環(huán)境中分組飼養(yǎng)，自由飲水、進食。

1.4 替代治療方法 術后第2天開始進行相應的干預，褪黑素替代治療組的每只大鼠按200μg/kg 劑量將褪黑素溶于0.5ml的5%（V/V）乙醇-生理鹽水中，每天在固定時間（18：00 pm）腹腔注射1次，連續(xù)給藥21天。在相同條件下，每天給予假手術組和去松果體組的每只大鼠腹腔注射0.5ml的5%乙醇-生理鹽水，連續(xù)注射21天。

1.5 學習記憶能力的測定

1.5.1 定位航行實驗 于術后16天開始用Morris水迷宮（中國醫(yī)學科學院藥物研究所研制，型號：DMS-2）測試，歷時4.5天，每天分上、下午2個時段，每只大鼠在每個時段測試4次，記錄大鼠每次自入水直至找到并爬上平臺所需的時間，即逃避潛伏期，如60s找不到平臺即記錄為60s，以此作為判斷大鼠學習能力的指標。

1.5.2 空間探索實驗 在測試的第5天下午撤走平臺，將大鼠放入水中，通過電腦測試系統(tǒng)記錄大鼠在2min內(nèi)的游泳軌跡，計算出大鼠在原平臺象限的游泳距離占總游泳距離的百分比，以此作為判斷大鼠記憶能力的指標。

1.6 組織切片制備 各組大鼠在完成測試學習記憶能力后，1%戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射麻醉，經(jīng)心臟灌注100ml 生理鹽水，繼之灌注500ml的4%多聚甲醛固定液（0.1mol/L PB液配制，pH 7.4，4℃）。除去顱蓋骨，將頭部固定于腦立體定位儀上，參照大鼠腦立體定位圖譜［6］，在前囟前1.6mm至前囟后4.8mm的范圍內(nèi)切取腦組織塊，置于相同的固定液后固定3h（4℃），轉(zhuǎn)至30%蔗糖溶液（0.01mol/L PBS配制，pH 7.4，4℃），待組織塊下沉后行冠狀連續(xù)冰凍切片，片厚40μm，隔3取1，收集于0.01mol/L PBS中，待反應。

1.7 免疫組化反應 采用SP法檢測SVZ的增殖細胞核抗原（proliferating cell nucleus antigen，PCNA）的表達，主要步驟如下：切片入3%（V/V）H2O2溶液室溫15min，消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性；入0.1%（V/V）Triton X-100溶液（0.01 mol/L PBS配，pH 7.4）室溫孵育1h；正常羊血清室溫封閉抗原20min；小鼠抗人PCNA單克隆抗體（1:100）室溫孵育22h；生物素結合IgG室溫孵育2h；SP室溫孵育2h；0.05%DAB（含0.01%（V/V）H2O2）室溫顯色約30s。在上述過程中，完成每一步驟后均用0.01mol/L PBS（pH 7.4）漂洗15min，然后再進行下一步驟。常規(guī)脫水、透明、中性樹膠封片。陰性對照實驗除用羊血清代一抗外，其余步驟與上述相同。

1.8 細胞計數(shù) 每只動物選取3張切片（前囟前0.8mm、1.0mm、1.2mm）作為觀察對象［6］，光鏡下（40×10）計數(shù)左側(cè)側(cè)腦室SVZ的背側(cè)、外側(cè)及內(nèi)側(cè)3個視野的PCNA陽性細胞數(shù)。

1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件中的單因素方差分析對原始數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理，用最小差異顯著性檢驗（LST）及Games-Howell檢驗對數(shù)據(jù)進行兩兩比較，以雙側(cè)α=0.05作為顯著性檢驗水準，最后得出的數(shù)據(jù)以x±s表示。

2 結果

2.1 Morris水迷宮測試結果 各組大鼠的逃避潛伏期及在原平臺象限游泳距離的百分比分別見表1及圖1。

從表1可見，除測試的第1時段外，去松果體組大鼠在其余測試時段的逃避潛伏期均比褪黑素替代治療或假手術組大鼠明顯延長，組間的差異有非常顯著性（P＜0.01），而褪黑素替代治療組大鼠與假手術組大鼠的逃避潛伏期較為接近，組間差異無顯著性（P＞0.05）。在整個測試中，去松果體、褪黑素替代治療及假手術組大鼠9個時段的平均逃避潛伏期分別為33.89、19.73及18.28s，其中去松果體組的平均逃避潛伏期分別比褪黑素替代治療組和假手術組明顯增加了71.8%和85.4%，組間差異有非常顯著性（P＜0.01），但褪黑素替代治療組與假手術組之間差異仍然無顯著性（P＞0.05）。

從圖1可見，去松果體、褪黑素替代治療及假手術組大鼠在原平臺象限游泳距離的百分比分別為18.7%、40.3%及45.8%；去松果體組大鼠分別比褪黑素替代治療組和假手術組大鼠明顯下降了53.6%和59.2%，組間差異有非常顯著性（P＜0.01），而褪黑素替代治療組與假手術組大鼠之間差異無顯著性（P＞0.05）。

2.2 PCNA陽性細胞的變化 SVZ的PCNA免疫反應產(chǎn)物定位于細胞核，呈棕黃色，陽性細胞核為圓形、橢圓形或梭形，各組大鼠SVZ的PCNA陽性細胞核形態(tài)均無明顯差異。此外，用羊血清替代—抗的反應結果也為陰性。對各組大鼠左側(cè)側(cè)腦室SVZ的PCNA陽性細胞核計數(shù)的結果見表2。

由表2可見，去松果體組大鼠SVZ的PCNA陽性細胞核數(shù)分別比褪黑素替代治療組及假手術組大鼠明顯下降了37.1%和38.8%，組間差異有非常顯著性（P＜0.01），而褪黑素替代治療組與假手術組之間則差異無顯著性（P＞0.05）。

3 討論

神經(jīng)干細胞是一種具有高度增殖能力的原始細胞，為了解這類細胞的增殖狀態(tài)，常通過觀察其細胞周期中的標志物變化來加以斷判之。PCNA既是屬于種系發(fā)生中高度保守的DNA多聚酶δ輔助蛋白，又是參加細胞DNA合成的一個不可或缺的蛋白因子［7］。PCNA定位于細胞核，在神經(jīng)干細胞增殖的DNA合成期中表達，且其表達水平與DNA合成的活躍程度呈正比［8］，故PCNA是研究神經(jīng)發(fā)生動力學的一個重要指標。由于PCNA具有以上特點，故本研究用其來觀測神經(jīng)干細胞的增殖變化。

既往研究表明，在體外培養(yǎng)的新生大鼠SVZ神經(jīng)干細胞經(jīng)表皮生長因子刺激后，再加入褪黑素可明顯提高神經(jīng)干細胞的增殖率［2］，而且褪黑素還可加速個體胚胎生長和發(fā)育的進程［3］，說明褪黑素對細胞發(fā)生及胚胎形成均產(chǎn)生明顯的正性效應。由此可推測，褪黑素有可能對成年在體SVZ神經(jīng)干細胞的增殖施加某種影響。為探討這一問題，筆者最近做了相關研究，結果初步顯示，通過切除松果體消除內(nèi)源性褪黑素的主要來源，可明顯降低成年大鼠SVZ的PCNA陽性細胞核數(shù)（P＜0.01）［5］；本研究結果則顯示，褪黑素替代治療可使因去松果體下降的PCNA陽性細胞核數(shù)明顯升高到正常水平（P＜0.01）。因此，以上結果與其他作者的基本一致［2，3］，也充分證實了筆者的推測，即褪黑素對成年在體SVZ神經(jīng)干細胞具有促增殖作用，而且此作用呈現(xiàn)出對部位、細胞種類及發(fā)育階段的非依賴性。其作用機制可能與兩方面有關：（1）褪黑素直接作用于神經(jīng)干細胞上的相應受體［3］，使PCNA表達上調(diào)，促進更多的細胞進入DNA合成期，為產(chǎn)生更多的子細胞提供了合成代謝的物質(zhì)基礎；（2）褪黑素作用于局部星形膠質(zhì)細胞上的相應受體［9］，促進星形膠質(zhì)細胞與神經(jīng)干細胞相互作用并合成及釋放多種細胞生長因子，后者可保護子細胞完成遷移抵達終點以及分化成局部中間神經(jīng)元［10］，這對于完成使局部神經(jīng)環(huán)路的結構得到不斷更新轉(zhuǎn)歸和整合以及維持功能的可塑性均有重要的生物學意義。

袁群芳等報道［4］，松果體源性褪黑素具有提高大鼠在Morris水迷宮的學習記憶能力。筆者前期的研究［5］、本研究亦表明，去松果體可使大鼠在Morris水迷宮的學習記憶能力下降（P＜0.01），褪黑素替代治療則可提高去松果體大鼠的學習記憶能力（P＜0.01），這與上述作者的相一致。此外，本實驗結果還首次顯示，在去松體或褪黑素替代治療狀態(tài)下，學習記憶的變化與PCNA陽性細胞核數(shù)的變化之間存在著驚人的相似之處，故兩者的變化趨勢呈現(xiàn)出平行關系。提示褪黑素很有可能通過前述的機制來提高SVZ的神經(jīng)發(fā)生，使神經(jīng)干細胞產(chǎn)生更多的祖細胞，經(jīng)吻側(cè)遷移途徑（rostral migratory stream）源源不斷地遷移到嗅球，最終分化成顆粒細胞和小球周細胞，從而提高嗅覺記憶功能［11］;也有可能通過促進基底前腦膽堿能系統(tǒng)的功能來提高學習記憶能力［4］。至于是否另有提高學習記憶能力的其他機制，有待于進一步研究澄清。

臨床研究表明，嗅覺障礙是在老年性癡呆早期首發(fā)的主要癥狀之一，并隨病程進展而加重［12］。此外，老年性癡呆患者腦脊液的褪黑素水平顯著下降，褪黑素分泌的節(jié)律性也明顯紊亂［13］。這些結果提示，在老年性癡呆的發(fā)病中，有可能由于褪黑素的合成和分泌減退以及節(jié)律異常，導致SVZ神經(jīng)干細胞的增殖嚴重受損，使嗅球需要更新的局部中間神經(jīng)元得不到及時補充，進而引發(fā)嗅覺及嗅覺記憶功能障礙。因此，除了可用褪黑素調(diào)動原位SVZ神經(jīng)干細胞來防治老年性癡呆外，還可在用神經(jīng)干細胞移植或基因治療該病中宜添加褪黑素，使得移植的神細干細胞能有效分裂、整合到靶組織，目的基因也能長期表達產(chǎn)物，從而在該病的神經(jīng)結構重建及功能恢復方面有可能獲得意想不到的效果。

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