時間:2023-05-05 09:14:23
導言:作為寫作愛好者,不可錯過為您精心挑選的10篇動物醫(yī)學論文,它們將為您的寫作提供全新的視角,我們衷心期待您的閱讀,并希望這些內容能為您提供靈感和參考。
1、畢業(yè)論文的背景及意義:
1.1背景:
近幾年我國的養(yǎng)殖事業(yè)發(fā)展迅猛,大中小型企業(yè)如雨后春筍。尤其是養(yǎng)豬業(yè)正是如日中天。但是,還存在著不少問題,仔豬成活率低、腹瀉等等。在一定程度上制約著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。在現(xiàn)代養(yǎng)豬生產中,合理的仔豬飼料是養(yǎng)豬成功的關鍵環(huán)節(jié)之一,它不僅影響仔豬階段的生長,還嚴重影響仔豬成年后的生產性能。而仔豬斷奶則是仔豬生產中的關鍵因素,仔豬在3~5周齡斷奶稱為早期斷奶(swineearlyweaning)。國外的早期隔離斷奶(sew)技術甚至把斷奶日齡降低到14天以下。仔豬早期斷奶的重要性和優(yōu)越性越來越被養(yǎng)豬業(yè)者所認識。仔豬斷奶后,首先是攝入營養(yǎng)成分的改變,一是由母乳改變成吃飼料;二是由豬呵護的生活方式轉變成完全獨立的生活方式;第三是生活環(huán)境發(fā)生了巨大的改變,有產房轉到仔豬舍,并結識新的伙伴,另外離開了母乳的喂養(yǎng),容易受到病源微生物的侵害而生疾病。據(jù)有關資料顯示,侯國方,徐鳳軍、王顯在杭報道顆粒飼料在制粒過程中將自身所含的淀粉糊化,使飼料易于消化吸收,提高了飼料的能量含量;同時破壞了胰蛋白酶抗營養(yǎng)因子等,提高蛋白質消化利用率;膨化還能限制某些脂肪酶的活性,減少飼料氧化分解,延長了飼料的保存期;制粒過程中還能殺滅原料中可能存在的沙門氏菌、大腸桿菌等病原菌,減少了仔豬腹瀉的發(fā)生。耿照銀,田正偉,彭友銀等采用相同營養(yǎng)的水平的顆粒飼料與粉狀飼料飼喂杜長大商品豬,在全程的飼養(yǎng)過程中都表現(xiàn)出了顆粒飼料的優(yōu)越性。顆粒飼料組的日增重、采食量、料肉比、千克增重飼料成本都比粉狀飼料組有所提高。
顆粒飼料與粉狀飼料相比,具有減少粉塵,防止挑食及營養(yǎng)組分分層、減少飼料浪費提高單位時間的采食量及降低采食能耗等作用對于飼料添加劑意義特別重大,可防止飼料生產及運輸中組分分離;可殺滅病原微生物,提高飼料的適口性,減少包裝運輸費用。但顆粒飼料在加工過程中某些營養(yǎng)成分失活,如維生素類和酶類。1.2意義:
本文旨在研究顆粒飼料和粉狀飼料飼喂斷奶仔豬,通過仔豬的生長發(fā)育及生產性能等方面進行對比實驗,對兩種飼料的飼喂效果進行了對比研究,為今后斷奶仔豬的飼養(yǎng)管理提供一定的理論基礎。
2、畢業(yè)論文的研究目標:
本試驗主要研究比較顆粒飼料和粉狀飼料對斷奶仔豬飼喂效果的研究,比較其平均日增重、平均采食量、料肉比、死淘率,從而養(yǎng)殖戶的提高經濟效益。
3、畢業(yè)論文的主要研究內容、研究方法、具體措施和研究的可行性、創(chuàng)新點:
3.1研究內容;
3.1.1不同飼料飼喂對斷奶仔豬平均日增重的影響。
3.1.2不同飼料飼喂對斷奶仔豬平均日采食量的影響。
3.1.3不同飼料飼喂對斷奶仔豬死淘率、飼料轉化率的影響。
3.2研究方法;
試驗前對兩組仔豬進行稱重,計算個體的平均體重,在試驗結束再進行稱重,然后計算仔豬每組的平均日增重、日耗料和料肉比根據(jù)當時的市場物價進行經濟效益分析。對所得數(shù)據(jù)進行單因子方差分析及T檢驗。
3.3具體措施;
在相同環(huán)境下采用不同的飼料進行飼養(yǎng)試驗。為了給斷奶仔豬選擇合適的飼料類型,選擇日齡相近,體重相近,健康狀況良好的仔豬60頭35日齡斷奶的仔豬隨機分成兩組,采用2種類型的飼料;即顆粒飼料組和粉狀飼料組,每組三個重復,每個重復10頭,經30d的飼養(yǎng)試驗。
顆粒飼料與粉狀飼料的主要營養(yǎng)成分指標(%)
項目粗蛋白粗纖維粗灰分鈣總磷賴氨酸
顆粒飼料
粉狀飼料≥21
≥21≤4
≤4≤7
≤70.7~1.2
0.7~1.2≥0.6
≥0.6≥1.2
≥1.2
3.4飼養(yǎng)管理:
飼喂時間是每天飼喂四次,分別是6;30、10;30、14;30、18;30進行飼喂,任其自由采食、飲水。預試驗期為一周,以利于仔豬適應飼料環(huán)境等條件。
3.4可行性:
本試驗在普通豬場即可完成,在吉林區(qū)周邊豬場很多,我們學校也有自己的豬場。試驗地點容易選擇,我們已經學過《動物營養(yǎng)學》、《豬生產學》、對斷奶仔豬相關知識有一定的了解和掌握,而我在豬場實習過,對仔豬的養(yǎng)殖和管理有了一定的了解,飼養(yǎng)后的采樣結果在我們學校的實驗室即可進行。
3.5創(chuàng)新點:
不同飼料飼喂斷奶仔豬在動物研究領域的應用研究報道較少,因此,通過以斷奶仔豬作為研究對象,不同飼料對斷奶仔豬生長性能的影響,從而,確定最適合斷奶仔豬的飼料,為飼養(yǎng)斷奶仔豬而提供參考和依據(jù)。
4、主要參考資料及使用的原始資料:
[1]胡文琴,孟慶麗,王恬.不同形狀飼料對豬生產性能的影響[J].糧食與飼料工業(yè),2004(5):29~30.
[2]陳潤生,魏國生.膨化顆粒飼料飼喂仔豬實驗[J].畜牧與獸醫(yī),2002(1):3~4
[3]顧平生,楊國明,張曦,等.仔豬膨脹顆粒飼料飼養(yǎng)試驗[J].云南畜牧獸醫(yī),2002(1):3~4
[4]陳權軍,關則記.乳豬日糧不同處理方法(膨化、壓粒、粉狀飼料)對剛斷奶仔豬生產性能的影響[J].當代畜牧2001(6):37~37
[5]耿照引,田正偉,彭友銀,等.牲豬全程飼喂顆粒飼料飼料試驗報告[J].湖北畜牧獸醫(yī),1999(2):36~37
[6]姚建軍,陳月霞,等.粉狀飼料、顆粒飼料飼喂不同毛色的杜約太三元雜交商品豬試驗[J].天津畜牧獸醫(yī),1999、16(1):24~25
[7]陳文存,沐學勤,范榮俊,等乳.豬優(yōu)化顆粒飼料擴大驗證試驗[J].云南畜牧獸醫(yī),2002(1):4
[8]傅仲,汪明,范光厚.早起斷奶仔豬的生長限制因素及營養(yǎng)對策[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2005(12):15~16
[9]盧亞萍,杜杰.斷奶仔豬腹瀉原因分析與防治[J].動物科學與動物醫(yī)學,2005(12):15~16
[10]侯國方,徐鳳軍,王顯航.仔豬膨化飼料魚顆粒飼料對比試驗(初報)[J].飼料與畜牧,1997(3):10~11
5、畢業(yè)論文的進度安排:
(1)20XX年4月:準備開題,完成開題報告。
(2)20XX年5月~2013年1月:試驗前的準備,試驗場的選擇,試驗材料的用品的搜集,試驗場的打掃、消毒,仔豬的選擇。正式試驗。
寧鄉(xiāng)豬的繁殖期長,且繁育能力較強。公豬3月齡性成熟,5~6月齡可配種。母豬4月齡第一次,7~8月齡可配種,利用年限約8~10年。成年母豬的有效可達12只以上,每胎產活仔數(shù)8~12頭。
1.1.1種質特性朱吉等[1]發(fā)現(xiàn)寧鄉(xiāng)豬經營養(yǎng)物質條件的改善及飼養(yǎng)科學的適應性變化,肢蹄臥系率降低92.2%,體尺體重性狀和繁殖性狀提高率分別達6.97%~27.67%、11.62%~17.44%,窩重提高率達26.91%~78.97%,特別是閹豬的生長速度和胴體性能明顯提高。寧鄉(xiāng)豬母豬日增重表現(xiàn)為前期低、中期高、后期下降的生長曲線,閹豬表現(xiàn)為前期高、中期低、后期回升的生長曲線,閹豬和母豬都具有生長肥育期日增重曲線的相似性。后備公豬的體重及體尺指標不及同齡母豬,主要是性成熟過早所致。
1.1.2肥育性能Rorz指出,改變日糧組成分與結構可以減少3.2%~62%的氮排出。寧鄉(xiāng)豬與瘦肉型豬氮的消化利用能力存在差異,寧鄉(xiāng)豬12.91%蛋白質日糧組具有較好的能氮平衡性。研究表明在寧鄉(xiāng)豬生長肥育后期添加一定量的半胱胺可促進生長、提高胴體瘦肉率和改善豬肉品質。寧鄉(xiāng)豬雜交組合具有較高的生長速度和胴體品質。寧鄉(xiāng)豬生長肥育性能的可塑性較強,閹公豬的生長肥育性能優(yōu)于母豬,優(yōu)化飼糧是提高其肥育性能的基礎。寧鄉(xiāng)豬肥育期日增重與膘厚、肥育率呈正相關;胴體長與胴體寬、后腿重與腿臀圍呈強正相關,與肥肉率呈弱正相關,與瘦肉率呈弱負相關;眼肌面積與瘦肉率呈弱負相關,而與肥肉率呈弱正相關。最近研究表明由于寧鄉(xiāng)豬肥膘產量高,相對產值較低,所以55~85kg階段是寧鄉(xiāng)豬的最佳屠宰期。
1.1.3母豬營養(yǎng)需要研究表明寧鄉(xiāng)豬母豬妊娠前期、妊娠后期和哺乳期能源分別為37%~39%、22%~24%和39%~41%,相應的日攝食標準消化能分別為18.9MJ、27.0MJ和45.5MJ,粗蛋白質分別為156g、242g、538g;提高母豬哺乳期采食量是節(jié)省能量、提高仔豬增重的重要途徑,補飼青料可提高母豬的飼料利用率。近期研究表明14%以上的日糧蛋白水平有利于促進寧鄉(xiāng)豬母豬的生長發(fā)育[7]。
1.2生理、生化指標研究表明寧鄉(xiāng)豬白細胞總數(shù)、紅細胞體積、淋巴細胞計數(shù)及血小板均低于三元豬;甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白與血清甲狀腺素T3含量高于三元豬,血清甲狀腺素T4和胰高血糖素含量下限值低于、上限值高于三元豬,血清葡萄糖含量低于三元豬可能與胰島素含量高于、胰高血糖素低于三元豬有關。與近交系五指山小型豬、廣西巴馬豬和貴州小型豬等國內小型豬相比,寧鄉(xiāng)豬的堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶、低密度脂蛋白-膽固醇和總膽固醇較高,而γ-谷氨酰轉移酶、三酰甘油、肌酐和高密度脂蛋白-膽固醇較低;與杜洛克豬、長白豬、大約克夏豬等國外引進品種豬相比,寧鄉(xiāng)豬的丙氨酸氨基轉移酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶明顯較高,總膽固醇明顯較低,γ-谷氨酰轉移酶、總蛋白、白蛋白、尿素氮、葡萄糖相差不大[9]。郭潔平等[10]研究發(fā)現(xiàn)與長白豬相比,寧鄉(xiāng)豬血清精氨酸、一氧化氮濃度較低,空腸前段和肝臟一氧化氮合成酶活性較高,腎臟中的一氧化氮合成酶活性最低,腸道和肝臟中N-乙酰谷氨酸合成酶mRNA表達水平最高。
1.3病理特性研究發(fā)現(xiàn)豬流感(H3)誘發(fā)寧鄉(xiāng)豬高熱病病理變化主要在呼吸器官,表現(xiàn)為氣管、支氣管充血,肺腫大,小葉間質增寬,肺尖葉有實質病變,腸胃出現(xiàn)卡他炎癥、彌漫性出血。外來良種豬及其三元雜交、二元雜交生豬發(fā)病嚴重,死亡率高,寧鄉(xiāng)豬及其與外來良種豬的雜交后病癥狀較輕,治療也容易一些,有的生豬甚至不治而康復,死亡率也相對較低[12]。
1.4肉質性狀寧鄉(xiāng)豬肌纖維纖細,紋理間脂肪分布豐富均勻,肉質細嫩,肉味鮮美,是北京奧運會唯一指定豬肉產品。根據(jù)營養(yǎng)需要推薦飼養(yǎng)標準配制日糧,測定肌肉常規(guī)成分、氨基酸、脂肪酸和礦物元素,發(fā)現(xiàn)寧鄉(xiāng)豬肌肉內脂肪為5.37%,風味氨基酸高達220.5%,必需氨基酸高達122.4%,油酸(18:1)51.0%,亞油酸(18:2)7.74%,不飽和脂肪酸59.6%,是與深海魚油媲美的保健食品。寧鄉(xiāng)豬和三元豬鮮味氨基酸、必需氨基酸和氨基酸總量差異不顯著[1,13]。目前開展了寧鄉(xiāng)豬與商品瘦肉型豬生長激素基因功能比較研究,王文策等選用了融合表達載體構建寧鄉(xiāng)豬生長激素的原核表達質粒,成功構建重組原核表達質粒pET-GH。
1.5遺傳學特性研究發(fā)現(xiàn)寧鄉(xiāng)豬二、四、六月齡時體重變異系數(shù)均在16.28%以上,體長、胸圍、腿臀圍變異系數(shù)為5.66%~8.55%。寧鄉(xiāng)豬的體長與胸圍的遺傳相關系數(shù)為0.43,表型相關系數(shù)為0.74,這與寧鄉(xiāng)豬屬于脂防型豬種、具有邊長邊肥的特點有關。寧鄉(xiāng)豬頭長、額寬、腿臀圍、體高具有高遺傳力,頭長、額寬表型變量受環(huán)境偏差的影響較小。寧鄉(xiāng)豬的變異系數(shù)較小,產仔數(shù)、產活仔數(shù)、初生重、泌乳力、斷奶重等性狀的變異系數(shù)較大。寧鄉(xiāng)豬毛色是品種特征和遺傳穩(wěn)定性的標志;與瘦肉量相關系數(shù)最高的是后腿重。研究發(fā)現(xiàn)TLR6基因片段MspI酶切位點的兩種等位基因T/C的頻率分別為0.186/0.814,TT基因型個體顯著影響4月齡體質量性狀,TT基因型4月齡體質量比CC型高25.92%;TT基因型個體顯著影響45日齡體質量、6月齡體質量、體長和胸圍性狀,TT基因型45日齡體質量比CC型高12.46%,結果提示寧鄉(xiāng)豬TLR6基因不同基因型對生長性狀有著重要的影響,是寧鄉(xiāng)豬育種應用中的一個潛在遺傳標記。
2實驗寧鄉(xiāng)豬在生物醫(yī)學研究領域中的應用
2.1實驗寧鄉(xiāng)豬應用于醫(yī)學研究的優(yōu)點研究顯示靈長類、犬、貓等在動物實驗研究中受到倫理限制,而豬被認為是研究人類疾病最合適的實驗動物。既經濟實用,又克服了同種器官的短缺。豬心血管系統(tǒng)的解剖、生理特征和對致動脈粥樣硬化食物的反應與人類高度一致,成為心血管疾病研究的標準模型動物;豬腎臟的解剖和生理功能幾乎是人類的復制品;豬也是皮膚和整形外科手術、皮膚燒傷等較理想的模型動物;小型豬還是皮膚黑色素瘤研究的首選實驗動物。剛出生的或剖腹產得到的仔豬,是進行抗原抗體反應很好的模型動物,小型豬也是人類異種移植理想的組織、器官來源,可作為異種移植排斥反應的模型。
2.2實驗寧鄉(xiāng)豬在生物醫(yī)學研究中的應用最近研究發(fā)現(xiàn)原代寧鄉(xiāng)豬與其第一代仔豬13項血液生理指標如白細胞、紅細胞、血紅蛋白、紅細胞積壓及部分血液生化指標如總膽紅素、尿素氮、總蛋白等有顯著性差異,為寧鄉(xiāng)豬實驗動物化研究提供了參考數(shù)據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)寧鄉(xiāng)豬與人N-乙酰谷氨酸合成酶氨基酸序列同源性高達93.2%,與小鼠同源性達90.76%,為內源性精氨酸的營養(yǎng)調節(jié)提供一個新的途徑。趙拴平等發(fā)現(xiàn)寧鄉(xiāng)豬的總蛋白、三酰甘油、尿素氮、葡萄糖等血液生化指標都處于人參考值范圍內,堿性磷酸酶、總膽固醇均高于人參考值范圍。耿梅梅等還發(fā)現(xiàn),門靜脈灌注葡萄糖可使寧鄉(xiāng)豬血糖短期升高,白蛋白、低密度脂蛋白及α-淀粉酶活性下降,經機體代謝,上述指標逐漸恢復,但尿素氮、高密度脂蛋白、堿性磷酸酶和乳酸脫氫酶的活性基本無變化。研究還發(fā)現(xiàn)寧鄉(xiāng)豬與瘦肉型豬相比有不同的代謝,包括脂肪生成、脂質過氧化、能源利用和分區(qū)、蛋白質和氨基酸代謝、胃腸道微生物的發(fā)酵,肥胖寧鄉(xiāng)豬可能是兒童肥胖研究的有用模型,也可能是研究動脈粥樣硬化、糖尿病有利模型。寧鄉(xiāng)豬完整線粒體基因組序列為有關遺傳機制的進一步研究提供重要數(shù)據(jù),但研究還表明寧鄉(xiāng)豬可能不宜作為異種移植的適當供體。
2、AP-PCR的技術方法和優(yōu)缺點
2.1模板DNA提取和質量檢測
模板DNA提取的方法有很多,應根據(jù)組織的不同和試驗需要確定,但其基本的原理相同,都是通過酶或有機試劑裂解組織使核酸游離出來,然后通過有機溶劑或吸附柱純化后提取。核酸的濃度和質量可通過UV分光光度計讀取D260nm與D280nm的比值和1%瓊脂糖凝膠電泳等檢測來確定(Mohini等,2011)。目前已有很多商品化的核酸提取試劑盒可供選擇,使用方便并可得到較高質量的模板(DNA或cDNA)。
2.2隨機引物的選擇
隨機引物長度通常為10個堿基,GC的含量為60%~80%的寡聚核苷酸鏈,隨機引物不僅核苷酸的排列順序是隨機的,而且所有引物的序列無直接相關性(韋莉萍,2001)。理論上,如果1條隨機引物反應可產生x個獨立的條帶,那么a條隨機引物同時參與反應就可得到xa2個條帶,但多條引物同時參與反應會相應的增加結果的復雜性和不穩(wěn)定性(Nandani等,2014)。隨機引物雖然可用于所有物種,但并不是所有的隨機引物擴增出來的結果都有意義,想要得到較為理想的結果仍需根據(jù)研究對象和研究目的進行引物的篩選和反應條件的優(yōu)化,一般來說選擇能產生中等復雜度的圖譜的引物(Nandani等,2014)。
2.3AP-PCR擴增條件
AP-PCR也包括變性、退火、延伸的經典PCR過程。變性過程在94℃進行,一般來說預變性3~5min;退火溫度在35~38℃,也可根據(jù)引物Tm值來確定,一般退火溫度比引物Tm值低3~5℃;延伸溫度在72℃,在此溫度下Taq酶的合成效率約為2000bp/min(Kumari等,2013)。AP-PCR的試驗條件、模板的質量和濃度及反應體系中Mg2+的濃度等都可能對擴增的結果產生影響,想要得到較為理想的試驗結果,反應體系的優(yōu)化和試驗操作的標準化是非常重要的(Mohini等,2011;Kumari等,2013;Babu等,2014)。
2.4AP-PCR的優(yōu)點
AP-PCR延續(xù)了PCR的效率高、靈敏度高、樣品用量少等優(yōu)點,同時又兼有自身的優(yōu)點:①不同種類的生物樣品即可使用通用的隨機引物進行基因分析(Welsh等,1991);②可在對研究對象不了解的情況下進行基因多態(tài)性分析,從而對研究對象進行遺傳分析和分類研究(Williams等,1990;Welsh等,1991);③對于研究對象DNA樣品量有限的情況也適用(Nandani等,2014);④隨機引物易獲得,試驗成本低,技術容易掌握,除此之外,可對AP-PCR產生的基因條帶進行純化和克隆,以便進一步分析(Ge等,2014)。
2.5AP-PCR的局限性
AP-PCR雖然具有很多獨特的優(yōu)勢,但目前仍處于應用的探索階段,其本身仍有局限性:①AP-PCR技術通常是對顯性基因標記進行分析,這就意味著不能將純合子與雜合子區(qū)別開(Babu等,2014);②由于無明確的目的序列,如果發(fā)生擴增條帶的缺失就無法得知是什么原因導致的,不利于對擴增結果的分析(Kumari等,2013);③AP-PCR的結果分析需要專業(yè)的帶譜分析知識,否則很難從結果中得到有意義的信息;④AP-PCR結果的重復性問題一直是限制其廣泛應用的主要原因,由于其結果受DNA模板的質量、反應體系成分和反應條件的變化等因素的影響,其擴增產物的穩(wěn)定性難以控制(Mohini等,2011);⑤AP-PCR結果通過凝膠電泳來觀察,但遷移率相同的譜帶的核苷酸同源型不明等情形易造成干擾,有時電泳遷移率相同的片段并非同源,這就給結果分析帶來很多不確定性(Nandani等,2014)。
3、AP-PCR技術研究進展
3.1AP-PCR技術自身的優(yōu)化
近年來,不斷有研究者對AP-PCR技術進行改進和優(yōu)化,使其更具可操作性、實用性和更廣泛的應用領域。劉剛等(2004)對AP-PCR進行了優(yōu)化,建立了多重隨機引物PCR(M-RAPD)技術,M-RAPD通過使用3條組合的隨機引物在較高的退火溫度下對肺炎鏈球菌、糞腸球菌和大腸埃希菌耐藥菌株等的染色體DNA進行擴增獲得了穩(wěn)定的種株特異性的DNA指紋圖,其所提供的基因信息要遠多于傳統(tǒng)的RAPD技術。Xiong等(2012)對AP-PCR進行了反應程序優(yōu)化和隨機引物中G/(G+C)不同比例研究,結果表明,反應程序中從退火步驟到延伸步驟的時間延長,溫度變化由3℃/s下降到0.3℃/s時,PCR產物條帶明顯增加,這可能是由于延長溫度變化的時間可提高引物與模板結合的穩(wěn)定性(Fu等,2000),在比較了隨機引物中G/(G+C)不同比例的PCR產物后發(fā)現(xiàn),當G/(G+C)比例在0.7時PCR產物的條帶最多,也更適用于進行AP-PCR反應,因此反應程序的溫度變化和隨機引物中G/(G+C)的比例可能也是影響AP-PCR結果的重要因素。Zou等(2003)報道了利用兩步AP-PCR方法在微量DNA樣品中擴增未知序列DNA并進行克隆。第1步PCR利用29個核苷酸序列的引物進行擴增,Ran5-29(5′-GTTCTACACGAGTCACTGCA-GNNNNNNNTGGC-3′),這一隨機引物包括21個已知核苷酸序列部分,7個隨機核苷酸序列和1個3′端TGGC的卡子結構,在隨機序列前6個核苷酸序列構成了1個PstⅠ位點,其中3′端卡子結構在退火時可與含有GCCA位點結合,保證了隨機序列可與GCCA上游的序列匹配,3′端TGGC的卡子結構可使引物與模板的匹配數(shù)增加7~11個核苷酸,PstⅠ位點決定PCR產物的長度,并保留1個黏性末端,保證了克隆的順利進行。第2步PCR使用可與Ran5-29相匹配的19個核苷酸的Fix5-29(5′-GTTCTACACGAGTCACTGC-3′)作為引物,獲得的產物進行純化、克隆分析。結果表明這種策略可檢測臨床樣本DNA的最小量在1pg,克隆靈敏度達到100fg目的DNA模板。這種方法較普通AP-PCR靈敏度更高,適用于樣本量極少的臨床樣品檢測。Clem等(2007)在對比了AP-PCR方法的不同擴增策略,在此基礎上建立一種快速有效的檢測不明病原的多重隨機RT-PCR方法。在對血液樣本進行過濾后加入了DNase和RNase消化,利用宿主基因對DNase和RNase敏感而衣殼保護的病毒對其不敏感的特點,去除宿主自身基因的污染。其利用單一十聚核苷酸為引物,引物序列為(V8A2)5′-VVVVVVVVAA-3′,V=A、G或C,3′2個A提供了一個“l(fā)ock”結構,引物中不含有胸腺嘧啶脫氧核苷酸(T)可避免發(fā)生引物二聚體,但這一結構不可避免的會影響引物與模板的結合。試驗結果一旦監(jiān)測到病毒的擴增產物即可通過鳥槍法克隆測序鑒定。這一方法對病毒的出現(xiàn)或重組進行快速監(jiān)測和鑒定有很強的實用性,其檢測靈敏度達到1000克隆/mL,應用這一技術成功從血液樣品中檢測并獲得了3種獨立病毒的部分序列。
3.2以AP-PCR為基礎衍生的分子生物學技術
隨著分子生物學技術的發(fā)展,單一的AP-PCR技術已不能滿足研究的需要,因此為了克服AP-PCR的一些缺點在其基礎上衍生出包括非序列依賴單引物PCR(SISPA)、簡并核苷酸引物PCR(DOP-PCR)、DNA擴增指紋印記(DAF)、微衛(wèi)星引物PCR(MP-PCR)等分子生物學技術。SISPA方法最早是由Reyes等(1991)建立起來的,其以AP-PCR為基礎,非對稱的單一引物與DNA模板的鈍末端直接連接,隨后經過若干循環(huán)的變性、退火和延伸后,模板的數(shù)量得到擴增,后經克隆、測序、分析得到基因序列。Breitbart等(2005)在SISPA的基礎上建立了DNase-SISPA聯(lián)用的方法,增加了樣品過濾和DNA酶消化等步驟,成功的從人的血液臨床樣品中發(fā)現(xiàn)了新的病毒基因。Djikeng等(2008)在已有研究基礎上進行了新的改進,在樣品的處理中加入RNase酶以清除外源RNA的污染如核糖體RNAs。針對有polyA尾的病毒,在反轉錄過程中加入六聚核苷酸隨機引物5′端加入一段病毒特異性引物序列,形成結合引物(FR26RV-N:5′-GCCGGAGCTCTGCAGATATC-NNNNNN-3′),同時加入連接polyT的引物(FR40RV-T:5′-GCCGGAGCTCTGCAGATATC-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3′)以增加對病毒基因3′端的覆蓋率。這種在六聚體隨機引物連接一保守序列即病毒特異性引物,可增加對病毒基因5′的捕獲,從而使SISPA的成功率大大提高。DOP-PCR技術是在AP-PCR基礎上建立起來,其引物(DOP-ORI-Xho)由22個核苷酸組成,3′和5′端的特異核苷酸序列和中間的6個核苷酸構成的隨機引物組成(Telenius等,1992)。由于隨機引物的簡并性,每個反應包含著數(shù)以千對的引物。DOP-PCR的反應程序包含2個不同的部分,前5個循環(huán)引物的3′端至少有12個連續(xù)的核苷酸與模板DNA相結合,對引物和模板的匹配度要求不高,在隨后的30~40個循環(huán)里,擴增錯配的幾率會逐漸降低。初始反應產物將成為模板,用相同的引物進行擴增,擴增產物通過克隆測序即可獲得基因序列(韓燾等,2013)。Csaba等(2002)打破了DOP-PCR只用同一種引物的傳統(tǒng),嘗試了5條新的可用于反應的引物,使反應時間由原來的7~8h縮短為2h,縮短了變性過程的時間,在取得理想結果的同時,減少了擴增酶的用量,提高了DOP-PCR的效率和實用性。DAF是一種改進的AP-PCR分析技術,與AP-PCR技術不同的是,DAF使用的引物濃度更高,長度更短(約5~8個堿基),在PCR反應上只包含2個溫度的循環(huán),省去了延伸的步驟,使用聚丙烯酰胺凝膠電泳,通過銀染方法觀察結果。DAF通常會產生非常復雜的帶型,因此它所提供的譜帶信息也比AP-PCR大得多(Caetano-Anolles等,1993)。Al-h(huán)ag等(2007)應用DAF鑒定8株細胞系,研究結果表明,DAF可產生穩(wěn)定的可供區(qū)分的PCR譜帶。Ehsan等(2011)應用DAF技術對分離到的25株牛隱孢子蟲進行亞型的鑒定,結果發(fā)現(xiàn)分離的25個蟲株分屬于為3個不同的亞型。MP-PCR是以AP-PCR為基礎的分子標記技術。Ma等(1996)發(fā)現(xiàn)真核生物基因組中存在短串聯(lián)重復序列,又稱微衛(wèi)星DNA或簡單重復序列(simplesequencerepeats,SSR)。真核生物基因組中SSR的分布是隨機的,大約每隔10~50kb就有1個SSR。SSR位點最常見是雙核苷酸重復,即(CA)n和(TG)n,每個微衛(wèi)星DNA的核心序列結構相同,重復單位數(shù)目10~60個。MP-PCR的引物是與SSR位點互補的二聚或三聚核苷酸重復序列,如其引物序列可是(TA)10或(CGA)6,擴增的是SSR之間不同長度的DNA序列,將擴增產物進行凝膠電泳,根據(jù)分離片段的大小決定基因型并計算等位基因頻率(Dawson等,2013)。MP-PCR克服了AP-PCR引物的不確定性,增加了PCR產物譜帶的穩(wěn)定性和針對性,該技術也已廣泛應用于物種分子標記、基因圖譜繪制和基因差異性分析等方面(Tian等,2014;Ding等,2014;Wei等,2014)。
3.3AP-PCR與其他分子生物學技術的聯(lián)用
擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)技術是將基因組DNA先用限制性內切酶切割,然后將雙鏈接頭連接到DN段的末端,接頭序列和相鄰的限制性位點序列,作為引物結合位點(Rikalainen,2013)。針對AP-PCR結果譜帶核苷酸同源性無法確定的缺點,Tan等(2011)將AP-PCR與AFLP進行聯(lián)用,利用2種方法各自的優(yōu)勢,在對可能含有未知病原的臨床樣品進行檢測,以實驗室確診的登革1型病毒為陽性對照,首先用AP-PCR對有限的樣品基因進行隨機擴增,然后使用AFLP技術對進行擴增從而得到樣品穩(wěn)定的DNA多態(tài)性標記。此方法克服了AP-PCR的同源性不明問題,同時比單獨使用的AFLP方法進行檢測的靈敏度提高100倍,在臨床樣品的檢測中有很大的實用價值。高通量的測序技術也被稱為下一代的測序技術,其與AP-PCR技術的配合使用,讓AP-PCR有了更廣闊的應用前景。Hang等(2012)首先使用錨定隨機引物P17N8(5′-GTTTCCCAGTAGGTCT-CNNNNNNNN-3′)進行RNA反轉錄,在通過錨定隨機引物P17N8和P21(5′-CGCCGTTTCCCAG-TAGGTCTC-3′)同時進行AP-PCR擴增,再通過高通量的測序技術對PCR產物進行測序,對得到的基因序列進行拼接處理,從而得到了奧羅普切病毒和卡拉帕魯病毒L片段完整基因序列。vanderHeij-den等(2012)利用序列非依賴性病毒基因片段擴增方法與Roche-454測序技術聯(lián)用,成功的從患急性肝炎病犬的肝臟組織檢測出犬Ⅰ型腺病毒基因,研究結果表明AP-PCR技術和下一代的測序技術聯(lián)合使用的方法在獲得病毒完整基因序列和檢測病原等方面的實用性。
4、AP-PCR技術在動物醫(yī)學中的應用
4.1在傳染病流行病學和病原遺傳學分類中的應用AP-PCR由于其獨特的技術優(yōu)勢,在獸醫(yī)傳染病學和病原遺傳學分類中已得到廣泛應用。Leh-marn等(1992)用此技術對念珠菌屬的分離菌進行分析,試驗結果表明,同一菌種的不同菌型間呈現(xiàn)出DNA長度的多態(tài)性;此帶型圖在同一菌種的不同菌型間,其相似程度遠大于不同種的菌株,這也說明每種菌的隨機引物PCR帶型極具特征性。Louie等(1996)用2種引物檢查15株李斯特單核菌相關流行分離株和36株不相關流行分離株。經擴增后的帶型分析,將其分為9個型,每個型中又分有不同的亞型。Zadoks等(2000)在牛乳樣品中分離到23株金黃色葡萄球菌,經AP-PCR鑒定1~8株屬于Ⅰ型菌,9~20株屬于Ⅱ型菌,其余3株分別屬于Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型菌。Butler等(2001)應用該技術對3次牛霉形體暴發(fā)流行菌株進行了檢測,結果表明,發(fā)生在其中2個養(yǎng)牛場的流行病原菌具有一致的指紋圖,引而具有相同的感染來源,而在另一牛場分離的菌株間則顯示了指紋圖譜的顯著異型性,說明它們具有多個感染來源。王雪敏等(2011)利用多組隨機引物對副雞禽桿菌10個國際標準株、血清C型疫苗株和4個國內分離株進行AP-PCR擴增,結果顯示,所有菌株可分為11個譜型,聚為4類。劃分的11個譜型可和現(xiàn)有分型方法中的不同亞型一一對應,提示這種方法可區(qū)分不同血清亞型。AP-PCR作為寄生蟲遺傳學分類鑒定的方法已得到廣泛應用,克服了傳統(tǒng)分類方法難以解決的問題。Macph-eson等(1993)應用AP-PCR技術區(qū)分來自不同宿主的7種艾美爾球蟲,結果表明選擇合適的引物可對7種球蟲進行鑒別。張偉信等(2003)應用該技術對雞柔嫩艾美耳球蟲不同地理株的多態(tài)性研究,結果表明不同地理株間及同一地理株親代與子代間均存在DNA多態(tài)性差異,其中不同地理株間種內變異程度較大,同一地理株子代與親代間也發(fā)生遺傳變異,但變異程度較小。
4.2在病原差異基因分析中的應用
AP-PCR技術進行RNA指紋圖譜分析不僅能鑒定基因的表達差異,而且能顯示低水平表達的基因差異。Nicho-las(2000)應用此方法鑒定了絲裂霉素C誘導下鼠傷寒沙門氏菌SOS調控基因表達的差異,結果表明,絲裂霉素C誘導后21條基因譜帶出現(xiàn)表達水平的上調,其中20個基因片段對應的是可辨識的基因序列,15個基因序列與數(shù)據(jù)庫中基因序列無同源性,被確定為新的表達序列,6個基因片段與SOS基因編碼的調控蛋白有關。Diana等(2005)應用AP-PCR技術對芐硝唑作用下克氏錐蟲基因表達差異多態(tài)性的研究,結果發(fā)現(xiàn)對芐硝唑敏感和對芐硝唑抵抗種群之間系統(tǒng)指紋圖譜存在一定的差異,其中可能存在克氏錐蟲對芐硝唑擁有抗性的表達機制,雖然抗性種群在芐硝唑作用下系統(tǒng)指紋圖譜沒有明顯的變化,但敏感種群間的系統(tǒng)指紋圖譜卻有著明顯的變化。AP-PCR技術為鑒定基因差異提供了一種快速有效的方法。
4.3在未知病原檢測中的應用
病原微生物引起的動物疫病呈現(xiàn)出復雜性和非典型性等特征,普通的臨床診斷方法很難確定病原的種類,這種情況下使用傳統(tǒng)PCR方法檢測臨床樣品的效率不高,而且存在漏檢可能。AP-PCR技術提供了一個更為全面、快速和靈活的檢測方法,對病原微生物進行全基因組的檢測(姚四新等,2010)。Djikeng等(2008)使用DNase-SISPA技術在牛的血清中分離到牛鼻病毒基因。Clem等(2007)利用改進的AP-PCR方法,從血液樣品中檢測并獲得了3種獨立病毒的部分序列,即腺病毒17、卡薩奇病毒A7和呼吸道合包體病毒B。周斌等(2004)在研究鴨病毒性肝炎病毒時,發(fā)現(xiàn)其種毒可能受到污染,隨后挑選4條隨機引物對其進行反轉錄PCR擴增,共擴增出3條基因片段??寺y序的結果表明,與禽腺病毒(雞胚致死孤兒病毒)基因組部分序列同源性分別高達99.5%、99.6%和99.5%,從而確定了鴨病毒性肝炎病毒雞胚尿囊液種毒受到禽腺病毒的污染。黃欣梅等(2011)采用DNase-SISPA對導致鴨、鵝產蛋下降的病原基因進行擴增,并在此基礎上設計了1對特異性引物成功的擴增出新型鵝黃病毒JS804毒株基因。
1課題:
《心理障礙》的任務驅動式教學教學目標:(1)能力目標。熟悉心理障礙概述、神經癥性障礙。(2)知識目標。掌握心理障礙的概念;心理障礙評價原則;心理障礙判斷標準、分類等。(3)素質目標。掌握心理障礙分類及各種常見的心理障礙。(4)重點難點。神經癥性障礙。(5)解決辦法。進行理論知識的講解,通過視頻觀看和技能訓練,提高診療水平。(6)教學準備。教案、視頻、網絡及多媒體教室。(7)教學學時。2學時。
2教學步驟設計
2.1引入
案例引導:背誦《考場守則》的大明大明是高校大學三年級學生,他不喜歡現(xiàn)在所學的專業(yè),認為是自己高考發(fā)揮失利,檢查不仔細才進到現(xiàn)在的大學。因此,他在大學的每次考試都會反復檢查試卷,為此,感到焦慮不已。大學二年級時,他每天早上都背誦《考場守則》以后才能安心上課,如果沒有背完,則焦慮緊張、思緒混亂、無法上課,同學們都不理解大明的這種行為,他自己也感到痛苦不堪。通過“背誦《考場守則》的大明”這個案例,引導學生討論、思考問題(1)本案例中描述的大明是否有心理障礙?(2)心理障礙的評價原則是什么?準備:教師分布學習任務,把學生分成幾個小組共同探討學習。
2.2知識講解
通過案例引導,引出本節(jié)教學內容。
2.3心理障礙概述
心理障礙:也稱病理心理、變態(tài)心理、心理疾病、異常心理等,是指人的心理、行為及人格上的種種異常,表現(xiàn)為一個人沒有能力按照社會認可的適宜方式生活,以致使其行為后果對本人和社會都造成不適應。心理障礙的“三原則”:主觀世界與客觀世界的統(tǒng)一性原則:心理是客觀現(xiàn)實的反映,任何正常的心理活動和行為,無論形式和內容都應與客觀環(huán)境保持一致性,否則就為異常。心理活動的內在協(xié)調性原則:個體的知、情、意在自身是一個完整、協(xié)調的統(tǒng)一體,各種心理過程之間具有協(xié)調一致的關系。人格相對穩(wěn)定性原則:人格是個體在長期的生活經歷過程中形成,具有相對穩(wěn)定性,并在一切活動中顯示出區(qū)別于他人的獨特性,在沒在外界重大刺激和變革的情況下,一般不易改變。如果個體在沒有明顯外部原因的情況下,人格表現(xiàn)反復無常,往往是心理異常的一個突出特點。心理障礙判斷標準:標準包括:經驗標準、社會適應標準、醫(yī)學標準、統(tǒng)計學標準。心理障礙分類:(1)輕度心理障礙:是指心理活動某些方面受損,表現(xiàn)為高級神經功能活動失調,往往無器質性損傷,適應環(huán)境的能力受到一定的影響,但有自知力。(2)重度心理障礙:是指個體的心理障礙程度較重,心理全面受損,心理活動的各方面協(xié)調一致性瓦解,個體與現(xiàn)實環(huán)境的關系嚴重失調。有些人可能腦部還存在某些器質性病變,對個體心理和社會的危害較嚴重。(3)心理生理障礙。是由于心理因素的作用而導致的軀體功能性障礙和軀體器質性病變的一類疾病,這類疾病在發(fā)生、發(fā)展及轉歸過程中都與心理社會因素的刺激有關。(4)人格障礙。是指人格征明顯偏離正常,使病人形成固定的、持久不變的異常行為模式。(5)行為問題和不良行為習慣。是指影響健康的行為習慣,常見的不良行為有:藥癮、煙癮等。
2.4神經癥障礙
神經癥定義:又稱神經官能癥,是一組非精神病性功能性障礙。病人深感痛苦,且妨礙心理功能或社會功能,但沒有任何可證實的器質性病理基礎,病程遷延呈發(fā)作性。其共同特征:一組心因性障礙;功能性障礙;具有精神和軀體兩方面癥狀;有一定人格物質基礎;是可逆的;社會功能相對良好;自知力充分。常見分類:(1)恐怖癥。以恐怖癥狀為主要臨床表現(xiàn),病人對某種特定事件、處境或在與人交往時產生強烈的恐怖和不安,有心悸、出汗、手抖等植物功能失調癥狀,采用回避方式來解決這種焦慮不安。病人明知沒有必要,但不能阻止恐怖發(fā)作。分為社交恐怖、場所恐怖、特定恐怖三種類型。(2)強迫癥。是一組以強迫癥狀為主的神經癥,其特點是自我強迫和自我反強迫同時存在,病人意識到行為的不必要性,但不能控制,并為此感到強烈不安。分為強迫觀念和強迫行為二種類型。(3)焦慮癥。是以焦慮、緊張為主的情緒障礙,伴有植物神經系統(tǒng)癥狀和運動性不安。焦慮癥病人的焦慮并非由于實際的威脅或危險所引起,并且其緊張驚恐的程度與現(xiàn)實情況很不相稱,分為驚恐障礙和廣泛性焦慮兩種類型。(4)疑病癥。是一種以持久的擔心或相信各種軀體癥狀的優(yōu)勢觀念為特征的神經癥,病人因這些癥狀反復就醫(yī),各種醫(yī)學檢查陰性和醫(yī)生的解釋均不能打消其疑慮。即使有時病人確實存在某種軀體障礙,也不能解釋所訴癥狀的性質、程度,或其痛苦與先占觀念。(5)神經衰弱。是指一種以腦和軀體功能衰弱為主的神經癥,以精神易興奮又易疲勞為特征,常有情緒煩惱、緊張、易激惹等癥狀,這些癥狀不能歸因于軀體疾病、腦器質性病變或其他精神疾病,但病前可存在持久的情緒緊張和精神壓力。
2.5教學效果驗收訓練
為更好地解決就業(yè)、考研與畢業(yè)論文(設計)在時間上的沖突,保證學生有足夠的時間開展實驗,完成論文(設計),動物醫(yī)學專業(yè)的畢業(yè)論文必須提早進行。根據(jù)培養(yǎng)方案的安排,一般動物醫(yī)學專業(yè)的學生在大三開始接觸專業(yè)課,因此從第五學期開始就落實指導教師,使學生能夠在課余時間跟隨導師進行有計劃的科研訓練,較早地接觸導師的科研工作,認識和熟悉研究課題,系統(tǒng)地培養(yǎng)學生的科研意識,提前做好畢業(yè)論文的選題等準備工作。在第六或第七學期,學生可以利用課余時間,搜集資料,開展相關的實驗研究。在第八學期學生只需整理數(shù)據(jù),完成論文撰寫工作即可。這樣的時間安排,可以確保學生有充足的時間搜集資料和開展實驗,有計劃有步驟地完成論文工作。同時也較好地解決畢業(yè)生找工作與撰寫畢業(yè)論文的沖突,有利于畢業(yè)論文質量的提高。
加強指導教師隊伍建設
指導教師的個人素質及其科研水平直接影響本科生畢業(yè)論文的質量,對指導教師資格應嚴格把關、嚴格審核,建立有效的指導教師遴選機制。動物醫(yī)學專業(yè)的畢業(yè)論文多涉及實驗研究,所以要求指導教師不僅具有系統(tǒng)的理論知識,還要具有較強的科研能力,同時還應具備良好的道德風尚、嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L。在指導論文過程中,教師的示范作用具有不可替代性。因此,必須重視指導教師的師德修養(yǎng),增強指導教師的責任意識。對那些缺乏科研實踐工作經驗或敷衍懈怠毫無責任心的教師應及時更換。學校應建立完善的指導教師監(jiān)督和獎懲機制。定期對指導教師的指導情況進行檢查和評價,發(fā)現(xiàn)問題及時處理,從制度上打消指導教師敷衍的僥幸心理,增強指導教師的責任意識。制定合理的獎勵政策和措施,把指導畢業(yè)論文的能力和質量作為評價教師的重要指標之一,對優(yōu)秀畢業(yè)論文的指導教師給予一定的精神和物質獎勵,并以此作為其晉級、職稱評定的一個參考條件。這樣可以充分調動指導教師的積極性,逐步提高指導教師的整體水平。
醫(yī)學期刊論文的統(tǒng)計學質量是醫(yī)學研究科學性與嚴謹性的重要標志,但目前國內高水平醫(yī)學期刊的論文中統(tǒng)計學誤用和濫用問題卻較為普遍。本文總結了《山東醫(yī)藥》近年來中的統(tǒng)計學問題,就其中實驗設計、統(tǒng)計分析方法選用、數(shù)據(jù)表達等方面作一些分析與討論,希望能引起各位專家學者和臨床醫(yī)生的共識與重視,促進我國醫(yī)學期刊質量的提高。
1.實驗設計方面存在的問題
實驗分組僅從專業(yè)角度考慮問題,未從統(tǒng)計學角度考慮問題。作者僅從專業(yè)上想如何設計分組,而沒有想到其涉及的實驗因素以及每個因素包含的水平,組與組之間是否具有可比性等一系列問題。
1.1不遵循或不重視隨機化原則隨機化是科研設計的重要原則,直接影響研究結果的可信度。隨機化既要隨機抽樣,還要隨機分組,并有足夠的樣本量作前提。然而,在醫(yī)學論文中許多作者對此不夠重視,主要表現(xiàn)在論文中統(tǒng)計處理隨機化不突出,隨機化缺失情況比較常見,有的論文甚至將隨機誤解為隨意、隨便,不采用隨機化處理方法,導致結果缺乏可靠性。還有些文章中沒有提出“隨機”抽樣的設計與方法,沒有排除標準,給人隨意選擇病例之感,且病例數(shù)少,因此沒有代表性,所得出的結論不可靠。部分文章雖然注明了“隨機”,但未提及采取什么方法進行隨機化研究或兩組間的例數(shù)相差甚遠,不符合隨機化的一般規(guī)律,沒有臨床參考價值。
1.2缺少對照研究或對照組設計不合理正確設立對照是臨床研究的一個核心問題,設立對照的意義在于說明臨床試驗中干預措施的效應,減少或防止偏倚和
機遇產生的誤差對試驗結果的影響。目前,國內許多期刊發(fā)表的論文對照組設計不合理現(xiàn)象比較普遍,尤其有些作者對某種新藥或新技術在臨床的應用觀察研究中,不設對照組,缺乏對照觀察,得出的結論缺乏科學性,令人懷疑。有的文章雖然設立了對照組,但在分析結果時,卻沒有將試驗組與對照組的結果進行比較,而僅將各組間的自身前后進行比較,從而使該研究失去對照意義。
對照組選擇不當,還表現(xiàn)在兩組間重要的臨床特征和基線情況相差太大,無可比性,如性別、年齡、病情、經濟情況和文化程度等不一致,如有些論文將健康人或志愿者作為對照組,使結果受到非處理因素的影響,產生偏倚或系統(tǒng)誤差,使結論不可信。
1.3均衡性原則掌握不夠均衡性原則要求實驗中的各組之間除處理因素不同外,其他可控制的非處理因素要盡可能保持一致。特別對疾病預后有重要影響的臨床特性一定要在組間分布均衡。各組間越均衡,可比性越強。有些作者在對病例進行分組時,忽視了均衡性原則,兩組之間沒有可比性,結論自然是錯誤的。具體表現(xiàn)在:有的文章對治療組與對照組的相應統(tǒng)一指標沒有設在均衡的水平上。對治療組情況交代的比較詳細,而對對照組的年齡、性別、病情等不予交代,或所選對照組的年齡與治療組不在一個年齡段,影響了作者對指標的觀察。
2.統(tǒng)計分析方面存在的問題
統(tǒng)計方法選擇非常重要,它直接影響結論的可靠性。臨床資料的結果變量可分為計數(shù)資料、計量資料和等級資料。計數(shù)資料指將觀察對象按兩種屬性分類,
如生存、死亡,治愈、未治愈,有效、無效等,通常轉化為率。如果是兩組間的比較,則采用四格表x2檢驗或其校正公式,如果是多組間率的比較,則采用行X列表資料x2檢驗。計量資料指對某一個研究對象用定量的方法測定某項指標得到的資料,一般均有計量單位。通常資料呈正態(tài)分布時,兩組間均數(shù)比較用t檢驗,多組間均數(shù)比較用方差分析和q檢驗。當資料不呈正態(tài)分布或方差不齊時,也可用秩和檢驗等非參數(shù)檢驗法。
2.1統(tǒng)計方法描述不清,結論欠科學文中未交代所用統(tǒng)計方法,如是配對設計的t檢驗還是成組設計的t檢驗,是Ridit分析還是x2檢驗,是作相關分析還是作回歸推斷。統(tǒng)計方法交代不清或根本不予交代,使讀者對論文結論的正確與否無法判斷。有的作者只提一句“經統(tǒng)計學處理”后,就寫出結論。有的甚至直接用P值說明問題,籠統(tǒng)地以P<0.05或0.01、p>0.05便稱結果差異有無顯著性,值的大小不說明差值的大小,它還與抽樣誤差大小有關[5]。因此,還應寫明具體的統(tǒng)計方法,如有特殊情況,還應說明是否采用了校正,應寫出描述性統(tǒng)計量的可信區(qū)間,注明精確的統(tǒng)計量值和P值,然后根據(jù)P值大小作出統(tǒng)計學推斷,并作出相應的醫(yī)學專業(yè)結論。
2.2假設檢驗方法和結果的表達不交代假設檢驗方法或假設檢驗方法交代的不具體、不清楚是醫(yī)學科研論文中常見的錯誤。如果不交代假設檢驗方法或假設檢驗方法交代的不具體.讀者就無法考察論文的統(tǒng)計學方法選擇的是否正確,無法核對計算結果是否準確。每一種假設檢驗方法都有其特定的適應條件和嚴格的適用范圍。對于同一組資料,采用不同的假設檢驗方法可能得出截然相反的結論。如將配對設計的資料按成組設計資料的方法處理,將會損失樣本提供的信息、降低檢驗效率,可能使原本有統(tǒng)計學意義的結果無統(tǒng)計學意義。
動物醫(yī)學專業(yè)人才培養(yǎng)模式的改革與實踐
根據(jù)全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試大綱要求,制訂合理的人才培養(yǎng)方案基于執(zhí)業(yè)獸醫(yī)考試要求,動物醫(yī)學專業(yè)課程體系與教學內容改革是教學改革的重點和難點。筆者所在動物醫(yī)學專業(yè)團隊從培養(yǎng)執(zhí)業(yè)獸醫(yī)的整體目標出發(fā),規(guī)劃設計出一套新的適應執(zhí)業(yè)獸醫(yī)考試的專業(yè)人才培養(yǎng)方案。通過課程重組,加強不同學科與不同課程之間的交叉和融合,將原先與執(zhí)業(yè)獸醫(yī)考試大綱考試要求不相適應的課程進行大范圍的調整和重組,加大了實踐課教學的比例,第5學期專門獨立出3周綜合技能訓練,專門培養(yǎng)學生對雞病、牛羊病和豬病的臨床和實驗室診斷能力,進一步提高學生動手操作的能力。新的人才培養(yǎng)方案中實踐課教學包括:課堂實驗、社會實踐、專業(yè)勞動、專項技能訓練、綜合技能訓練、相關專業(yè)的生產實踐、臨床診療實習、畢業(yè)實習等。各項實踐教學所占比例超過60%。同時將愛國主義教育、職業(yè)道德教育和社會公德教育落實到教學環(huán)節(jié)中。鼓勵教師提高執(zhí)業(yè)水平,進一步提高畢業(yè)生通過率高校教師中大部分都是本科院校碩士以上學歷,具有豐富的理論知識水平,但缺乏實踐鍛煉經歷。近幾年,大部分高職院校加快了青年教師赴企業(yè)鍛煉速度,但是由于教學任務繁重,青年教師數(shù)量過多等原因,致使部分青年教師去企業(yè)鍛煉時間過少或沒有這個鍛煉機會,青年教師實踐技能有待提高。筆者所在團隊積極鼓勵青年教師脫產赴企業(yè)鍛煉,或兼職去教學動物醫(yī)院坐診或出診,大大提高了青年教師執(zhí)業(yè)能力。筆者所在團隊30余名青年教師均參加了今年的執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試,執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師通過率達94%,大大增強了青年教師繼續(xù)努力,更進一步做好執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試教育、培訓工作的信心。著眼執(zhí)業(yè)獸醫(yī)考試大綱,選擇合適的教材、全面而深入地調整教學內容普通高等教育“十一五”國家級規(guī)劃、面向21世紀課程教材是當前高校獸醫(yī)專業(yè)通用教材,該教材全面地吸收了新理論、新技術和新方法,內容全面、詳實,可以作為教材使用。根據(jù)全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試大綱要求,應試考生能夠全面系統(tǒng)地掌握專業(yè)課程知識,給教學帶來巨大的挑戰(zhàn)。教學過程中應在全面把握教材內容的基礎上,結合執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試大綱要求,對授課內容進行適當修改。同時應對授課內容進行3個等級的劃分,即“全面掌握”、“重點掌握”和“一般性掌握”,使得教學重點更加突出,教學目的更加明確,針對性更強。通過該教學內容的調整,使學生能夠把握所要學習的重點,學習目的性增強,思路清晰;對改革后的新課程體系的運用,學生的學習能力進一步增強,克服了機械性的學習,取而代之的是適應性的學習,這為學生應試獸醫(yī)職業(yè)資格考試能力培養(yǎng)提供了必要的準備。
教學方法的改革與實踐
二、結果
1.三類核心期刊中動物實驗期刊數(shù)及其中動物實驗論文數(shù) 由表1可見該三類期刊中動物實驗研究論文較多?;A醫(yī)學類占期刊總數(shù)85,醫(yī)藥類、綜合類分別占85、72,平均80。該類期刊中動物實驗論文數(shù)占論文總數(shù):基礎醫(yī)學為50、醫(yī)藥28、綜合類35,平均39。
2.論文中各種實驗動物分布 從表2可知我國實驗動物研究使用了大鼠、小鼠、兔、豚鼠等10余種,其中大鼠使用分布最高,小鼠次之,兔、豚鼠、犬使用也較常見。
3.論文書寫中獲得資助情況 各類研究占比例最高的是未注明資助的項目,為53.1,其次為國家級資助項目、省部級資助項目、軍隊、高等院校資助項目(見表3)。
4.論文中寫明動物級別次數(shù)及比例、動物來源數(shù)及比例 1617篇論文中629次使用動物,多數(shù)能寫明動物種類、體重、性別、數(shù)量,有366次寫明了動物來源(約58),僅有38次(約6)寫明了動物級別[2],其中普通動物(一級動物)7次,清潔級(二級動物)17次,無特殊病原體動物(三級動物)16次,無菌級(四級)0次。
三、討論
21世紀是一個充滿創(chuàng)新的信息時代,作為信息傳播媒介的科技期刊更是一種多功能的復合型信息傳播工具,是直接地、系統(tǒng)地傳播科技知識和創(chuàng)新成果的載體。實驗動物是醫(yī)學研究的基礎和支撐條件,也是衡量一個國家生命科學技術發(fā)展水平的重要標志。十幾年來我國醫(yī)學實驗動物事業(yè)在法規(guī)的制定、科學管理、專業(yè)建設、科研水平、動物質量等方面都有了很大的發(fā)展和提高,但仍存在著差距。基礎醫(yī)學、藥學、綜合醫(yī)學是醫(yī)學中使用實驗動物較多的學科,通過20__年發(fā)行的在各專業(yè)享有較高聲譽的核心期刊中相關信息的分析,注意到以下幾方面的問題:
1.正確認識實驗動物科技工作的重要性 從我們的分析中可見,基礎醫(yī)學、藥學、綜合性醫(yī)學期刊中涉及實驗動物的期刊數(shù)、論文數(shù)和比例都很高,平均為80、39??梢娮鳛橹匾幕A學科之一的實驗動物學起著舉足輕重的作用。下個世紀,人與自然、人與健康的諸多問題在某種程度上,要靠生命科學研究來解決。在世紀之交的當今世界,要在生命科學研究領域中做出具有國際先進水平的科技成果,就要充分認識實驗動物工作對科研工作的重要性,加強實驗動物工作,使實驗動物科學水平更好地適應生命科學發(fā)展的需要。
作者:張洪友 曲永利 李祥輝 那璐 王春仁 單位:黑龍江八一農墾大學教務處 黑龍江八一農墾大學動物科技學院
開展畜牧獸醫(yī)綜合性技能訓練的條件
“雙師型”教師是開展綜合性技能訓練的前提動物醫(yī)學專業(yè)的特點就是實踐性強,這就需要任課教師既要具有普通高等教育教師資格,又要具有指導學生進行畜牧生產、動物疾病診斷和治療的能力。也就是既有理論講解能力,又有實踐動手能力。這就是大家通常所說的“雙師型”教師。學生想有一碗水,教師則至少有一桶水,甚至是一缸水,因此,擁有一批“雙師型”畜牧獸醫(yī)專業(yè)的任課教師是開展綜合性技能訓練的前提?;谶@個條件,黑龍江八一農墾大學動物科技學院為動物醫(yī)學專業(yè)應用本科配備的授課教師均是專業(yè)理論扎實,具有多年實踐經驗的教授或副教授,這為畜牧獸醫(yī)綜合性技能訓練的順利開展提供了人才保障。科學合理的實踐教學計劃是開展綜合性技能訓練的基本保障由于畜牧獸醫(yī)綜合性技能訓練是將動物生產與疾病診治多門課程的相關實驗聯(lián)系在一起的綜合訓練,實驗教學計劃是否合理直接關系到學生專業(yè)實踐技能的掌握程度。為此,從2006年該校招收應用本科生以來,就聘請動物科技學院資深的專業(yè)教師成立實踐教學培養(yǎng)方案制定小組,根據(jù)應用本科人才實踐教學培養(yǎng)的要求,制訂切實可行的實踐教學大綱和具體的實踐教學實施方案。實施方案課程設置合理,前后順序銜接流暢,知識體系完整,通過幾年的教學實踐,基本上能夠滿足動物醫(yī)學專業(yè)應用本科生的培養(yǎng)要求,這為該校畜牧獸醫(yī)綜合性技能訓練的順利開展提供了基本保障。完善的實驗條件是開展綜合性技能訓練的基礎良好的實驗儀器設備、配套的實驗場地是順利開展綜合性技能訓練的基礎,沒有這些條件的支持,技能訓練猶如無根之水,無本之木,教學效果大打折扣。為了給綜合技能訓練提供良好的硬件設施,該校每年均投入大量資金用于實驗室建設,特別是動物醫(yī)學省級重點實驗室、動物醫(yī)學基礎實驗省級教學示范中心的建設,使學生的畜牧獸醫(yī)綜合性技能訓練順利進行。另外,校內實習基地———動物疾病診療中心已成為該校動物醫(yī)學專業(yè)的綜合實踐場所,每年可接收60~80名學生在此實習。該中心擁有國內一流的動物疾病診斷設備,實驗室條件完善,并擁有各種動物正常及病理標本,便于學生從書本中學到的知識馬上就可以在動物疾病診療中心進行實踐。配套的優(yōu)質實訓教材是開展綜合性技能訓練的理論指南良好的技能訓練需要配套的優(yōu)質實訓教材進行指導,為此,該校應用技術學院組織具有豐富臨床經驗的副教授和教授們編寫了《畜牧獸醫(yī)專業(yè)綜合技能實訓教材》,2006年由東北林業(yè)大學出版社出版。該實訓教材具有內容針對性強、實驗步驟清晰、目的明確、方法準確、操作合理等優(yōu)點。2006年以來已在動物醫(yī)學專業(yè)應用本科使用,成為了畜牧獸醫(yī)綜合性技能訓練的理論指南。
開展畜牧獸醫(yī)綜合性技能訓練取得的成效
教師實踐教學能力得到進一步加強,成為真正的“雙師型”教師雖然在選擇給應用本科生任課的教學均為有豐富實踐經驗的教師,但是因為這些教師均為動物科技學院教師,一直給普通本科生和研究生上課,比較注重理論研究。現(xiàn)在給應用本科生上課,對教師提出了新的要求,那就需要有較強的實踐動手能力。因此,學校和教師本人都非常重視對實踐經驗的積累,學校有計劃地組織教師深入牧場、動物醫(yī)院、藥廠等地進行社會實踐,教師本身也經常到基層,去接觸新的養(yǎng)殖技術和疾病診斷方法,這樣,使教師實踐教學能力得到了進一步加強,真正成為了“雙師型”教師。學生的實踐動手能力顯著提高,畢業(yè)生就業(yè)率名列前茅動物醫(yī)學專業(yè)應用本科學生通過開展綜合性技能訓練,有效地提高教學質量,調動了學生自主學習和探索新知識的積極性,實踐動手能力明顯提高。因為該校對應用本科生采取的是“3+1”人才培養(yǎng)模式,即3年的理論學習,1年的生產實踐。學生們在最后的1年實習中,基本上掌握了動物常見疾病的診斷方法,能在農場或獸醫(yī)院獸醫(yī)的指導下開出處方,并獨立進行動物治療。這些學生成為了養(yǎng)殖場和動物醫(yī)院的重要人選,而且企業(yè)或動物醫(yī)院非常愿意選擇這些學生留下工作,這樣縮短了畢業(yè)生上崗的“后熟期”,滿足了企業(yè)的人才需求。該校動物醫(yī)學專業(yè)2010屆和2011屆畢業(yè)生的就業(yè)率均在97%以上,在4個應用本科專業(yè)中名列前茅,企業(yè)對畢業(yè)生的工作能力也非常滿意。提高實驗動物的利用率,節(jié)省實驗經費以前學生實驗是以課程來安排的,每門課程均獨立進行,需要單獨的實驗動物,這樣就造成了實驗動物的極大浪費?,F(xiàn)在采取綜合性技能訓練,將多門課程的多個實驗組合在一起,提高了實驗動物的利用率,節(jié)省了實驗經費。例如,動物醫(yī)學課程中的《普通畜牧學》(包括養(yǎng)牛、養(yǎng)豬、養(yǎng)羊、養(yǎng)雞等)《動物解剖學》《動物病理解剖學》《獸醫(yī)診斷學》《獸醫(yī)內科學》《獸醫(yī)外科學》《獸醫(yī)傳染病學》《獸醫(yī)寄生蟲學》等課程均需要實驗動物,《獸醫(yī)微生物學》《獸醫(yī)衛(wèi)生檢驗學》均需要采集病料,這些課程均單獨進行,需要大量的實驗動物,造成實驗動物的嚴重浪費?,F(xiàn)在的綜合性技能訓練,首先進行的是普通畜牧學內容,進行外貌評定、豬的體尺測量及體重估測、屠宰指標測定、豬肉品質測定,然后采集血液、尿液、糞便進行微生物學、診斷學、寄生蟲學實驗,依次對動物進行臨床診斷、內科檢查、外科手術、解剖學和病理解剖學觀察、傳染病檢驗、內臟寄生蟲檢查,最后取肌肉或器官進行獸醫(yī)衛(wèi)生檢驗。這樣,對一個動物就可以進行多項實驗,既提高了學生專業(yè)知識的綜合能力,又節(jié)約了實驗經費。
選題的重要來源。閱讀最新文獻資料,可以了解當前醫(yī)學科學研究的進展情況,開
拓思路、激發(fā)靈感,從而挖掘提煉出好的醫(yī)學論文主題。
3 醫(yī)學論文的一般體裁
3.1 實驗研究 一般為病因、病理、生理、生化、藥理、生物、寄生蟲和流
行病學等實驗研究。主要包括:①對各種動物進行藥理、毒理實驗,外科手術實驗
;②對某種疾病的病原或病因的體外實驗;③某些藥物的抗癌、抗菌、抗寄生蟲實
驗;④消毒、殺蟲和滅菌的實驗。
3.2 臨床分析 對臨床上某種疾病病例(百例以上為佳)的病因、臨床表現(xiàn)
、分型、治療方法和療效觀察等進行分析、討論,總結經驗教訓,并提出新建議、
新見解,以提高臨床療效。
3.3 療效觀察 指使用某種新藥、新療法治療某種疾病,對治療的方法、效
果、劑量、療程及不良反應等進行觀察、研究,或設立對照組對新舊藥物或療法的
療效進行比較,對比療效的高低、療法的優(yōu)劣、不良反應的種類及程度,并對是否
適于推廣應用提出評價意見。
3.4 病例報告 主要報告罕見病及疑難重癥;雖然曾有少數(shù)類似報道但尚有
重復驗證或加深認識的必要。
3.5 病例(理)討論 臨床病例討論主要是對某些疑難、復雜、易于誤診誤
治的病例,在診斷和治療方面進行集體討論,以求得正確的診斷和有效的治療。臨
床病理討論則以對少見或疑難疾病的病理檢查、診斷及相關討論為主。
3.6 調查報告 在一定范圍的人群里,不施加人工處理因素,對某一疾?。?/p>
傳染病、流行病、職業(yè)病、地方病等)的發(fā)病情況、發(fā)病因素、病理、防治方法及
其效果進行流行病學調查研究,給予評價,并對防治方案等提出建議。
3.7 文獻綜述 以某一專題為中心,查閱、收集大量國內外近期的原始醫(yī)學
文獻,經過理解、分析、歸納、整理而寫出綜述,以反映出該專題的歷史、現(xiàn)狀、
最新進展及發(fā)展趨勢等情況,并做出初步的評論和建議。
3.8 專題講座 圍繞某專題或某學科進行系統(tǒng)講授,介紹醫(yī)學發(fā)展新動向,
傳播醫(yī)學科研和臨床上實用的新理論、新知識、新技術、新方法,更新傳統(tǒng)的理論